乳腺癌中转化生长因子TGFβ1mRNA及蛋白表达及意义(2)
 |
1.3 PCR引物 TGFβ1及内参照β-actin引物由上海生工生物公司合成(表1)。
1.4 总RNA提取 采用Trizol试剂一步法提取组织总RNA，采用分光光度计检测OD260/OD280的比值以验证RNA的纯度，比值>1.8时，方可用于RT-PCR检测。
1.5 cDNA合成和PCR反应 取总RNA 1.5 μg，按逆转录试剂盒说明合成cDNA。PCR扩增条件：总体积50 μl，10×PCR buffer 5.0 μl，25 mmol MgC12 3.0 μl，10 mmol dNTP 1.0 μl，10 pmol/μl TGF-β1引物1.0 μl，10 pmol/L β-actin引物1.0 μl，5 U/μl Taq酶0.4 μl，cDNA模板2.5 μl，蒸馏水36.1 μl。PCR扩增循环参数为：94℃5 min变性，94℃ 20 s，68℃20 s，72℃1 min，循环35次，72℃延长反应5 min。取扩增产物5μl，2.3%琼脂糖凝胶电泳 ......
您现在查看是摘要页，全文长 4290 字符。