HPLC法测定无极膏中丙酸倍氯米松的含量
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【摘要】 目的 建立HPLC法测定无极膏中丙酸倍氯米松的含量，并确定其含量限度。方法 Diamonsil C18柱(4.6 mm×250 mm，5μm)；流动相：甲醇-水(70∶30)；流速：1.0 ml/min；检测波长为240 nm。结果 丙酸倍氯米松的线性范围为2.14~19.24 μg/ml，r=0.999 5。样品平均回收率为100.2%，RSD为1.1%。结论 本法简单，快速，结果准确，可有效控制该制剂中丙酸倍氯米松的含量。
【关键词】HPLC法；丙酸倍氯米松；无极膏
无极膏为复方制剂，具有抗炎、抗菌、镇痛和局部麻醉作用，临床上用于虫咬皮炎、神经性皮炎、湿疹等皮肤病；其主要成分为薄荷脑、樟脑、水杨酸甲酯、冰片、麝香草酚，其质量标准[1]未对各成分含量有限量规定；丙酸倍氯米松是一种强效局部用糖皮质激素，能减轻和防止组织对炎症的反应，但也有一定的不良反应，应对其含量进行控制；我们建立了丙酸倍氯米松的HPLC含量测定方法，可有效控制其含量。
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1 仪器与试药
1.1 仪器 高效液相色谱仪(岛津10A)；电子分析天平(JA1003)；紫外可见分光光度计(TU-1800)，超声波清洗器(KS-1500)。
1.2 试药 丙酸倍氯米松对照品(新乡琦宁药业有限公司提供，含量按100.0%计)；无极膏(新乡琦宁药业有限公司生产，批号：050821，050822，050823)；甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件[1，2] 色谱柱：Diamonsil C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：甲醇-水(70∶30)；流速：1.0 ml/min；检测波长为240 nm。
2.2 检测波长的选择 精密称取丙酸倍氯米松对照品适量，加50%的甲醇溶解并稀释制成每1 ml含5 μg的溶液，照紫外分光光度法于200~400 nm的波长范围内扫描，结果在240 nm的波长处有最大吸收；参照丙酸倍氯米松原料药的含量测定方法[3]，检测波长确定为240 nm。
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2.3 供试品溶液的制备
2.3.1 对照品溶液的制备
精密称取丙酸倍氯米松对照品10 mg，置50 ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密量取5 ml置100 ml量瓶中，加流动相配制成每1 ml含丙酸倍氯米松10 μg的对照品溶液。
2.3.2 样品溶液的制备
精密称取样品5.0 g，置50 ml量瓶中，加流动相适量，超声10 min，置80℃水浴中加热溶解，放冷至室温，加流动相稀释至刻度，摇匀，置冰浴中冷却2 h后，滤过，即得。
2.3.3 阴性样品溶液的制备
按处方(除丙酸倍氯米松外)配制阴性样品，按上述样品溶液配制方法配制空白溶液，在上述色谱条件下进样。结果表明，其他成分不干扰丙酸倍氯米松的含量测定。
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2.4 线性与范围
精密称取丙酸倍氯米松对照品10.7 mg，置50 ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液；再精密量取贮备液1、3、5、7、9 ml置100 ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，按上述色谱条件进样，结果见表1。
试验结果表明，在2.14~19.24 μg/ml的浓度范围内，丙酸倍氯米松线性关系良好。
2.5 精密度试验 精密量取线性关系试验中贮备液5 ml置100 ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1 ml约含丙酸倍氯米松10 μg的溶液，按上述色谱条件重复进样6次，结果见表2。
2.6 稳定性试验 取050822批含量测定项下的供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10 h进样，根据其峰面积的变化情况，评价溶液的稳定性，结果见表3。
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2.7 加样回收试验 称取丙酸倍氯米松对照品9.8 mg至100 ml容量瓶中，配制成含量为0.098 mg的贮备液；备用。取样品(050821)约5.0 g，精密称定，供9份，分别置100 ml量瓶中，加流动相适量，超声10 min，置80℃水浴中加热溶解，放冷至室温；其中3份分别加入上述贮备液3 ml，加流动相稀释至刻度，摇匀，置冰浴中冷却2 h后，滤过，其浓度为含量测定浓度的80%。3份分别加入上述贮备液5 ml，加流动相稀释至刻度，摇匀，置冰浴中冷却2 h后，滤过，其浓度为含量测定浓度的100%。3份分别加入上述贮备液7 ml，加流动相稀释至刻度，摇匀，置冰浴中冷却2 h后，滤过，其浓度为含量测定浓度的120%。取上述供试液，分别进样，计算回收量，结果见表4。试验结果表明，试验的回收率良好。
2.8 样品含量测定 精密称取样品各5.0 g照样品溶液配制方法处理，按上述色谱条件测定，以峰面积外标法计算样品含量，结果3个批号的含量分别为0.947、0.962、0.943 mg/10 g。
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3 讨论
3.1 样品处理的方法 丙酸倍氯米松在本品中含量很少，有效的提取方法是含量测定准确的重要前提；根据丙酸倍氯米松在流动相中的良好溶解性，我们采用流动相超声使之溶解，从而达到提取完全的目的；加样回收试验结果表明，本方法能有效准确地提取无极膏中的丙酸倍氯米松。
3.2 试验方法的评价 本试验方法经过精密度、稳定性、加样回收等相关指标考察，表明该方法操作简便、准确，可作为无极膏中丙酸倍氯米松的含量测定方法。
参考文献
1 陈振霆.HPLC测定无极膏中丙酸倍氯米松的含量.海峡药学，2005，17(3)：64-65.
2 林红，等.高效液相色谱法测定无极膏中丙酸氯米松的含量.中国药事，2005，19(7)：421-422.
3 中国药典.二部，2005：79., 百拇医药(杨玉凤)