中药沙棘提取液对血液肿瘤细胞杀伤作用研究
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【摘要】 目的 探讨中药沙棘提取液对人慢性髓样性白血病细胞(K562)、人急性粒细胞白血病细胞(HL-60)、小鼠T淋巴瘤细胞(YAC-1)肿瘤细胞的杀伤作用及其作用机理。方法 利用不同浓度沙棘提取液与K562、HL-60、YAC-1肿瘤细胞体外培养24 h，测定肿瘤细胞DNA合成能力及脱氧尿嘧啶核酸(UdR)释放率。结果 受视药对HL-60、YAC-1细胞DNA合成有抑制作用，对K562细胞DNA中UdR有释放作用。结论 沙棘提取液对血液肿瘤细胞生长有明显抑制作用，其药物机理可能与沙棘对其DNA合成的解聚作用和抑制合成作用有关。
【关键词】 沙棘提取液； DNA合成 ；细胞毒
沙棘[Hippophae rhamnoidesl HR] 又名酸刺，具有活血化淤、化痰宽胸、补脾健胃、生津止渴等功效。目前有关沙棘对机体生物活性方面的研究较多[1-2]。本文主要研究沙棘提取液(HRJ)对K562、HL-60及YAC-1血液肿瘤细胞DNA合成及解聚作用的影响。现将研究结果报告如下。
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1 材料和方法
1.1 沙棘提取液由吉林省肿瘤防治研究所提供，浓度为0.37 g/ml(含生药)4℃保存。
1.2 细胞株K562；HL-60；YAC-1均由吉林省肿瘤防治研究所传代保存。
1.3 125I-UdR、3 h-TdR由中国原子能科学研究院制造。
1.4 沙棘提取液(HRJ)对肿瘤DNA 合成能力的测定 取经24 h传代培养的肿瘤细胞，经离心洗涤后，用10%FCS-1640培养液(简写FCS-1640)调至细胞浓度为1×106/ml的细胞悬液。实验分用药组和对照组。用药组每支放免塑料管加入0.9 ml 含不同浓度沙棘汁的FCS-1640 以及0.1 ml 的细胞悬液，对照组除不加药物外，其它相同。于37℃，5%CO2 饱和湿度的CO2孵箱中培养1 h，取出离心洗涤3次，每管加37 kBq 3 h-TdR 并用1640完全培养液调至1 ml，37℃ CO2孵箱内培养30 min 取出，用多头细胞收集器收获细胞，用Tri-Carb460 CD型自动液闪计数仪测其cpm值，结果以3 h-TdR掺入量的抑制百分率表示。
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1.5 沙棘提取液(HRJ)对K562细胞中UdR释放作用的测定 传代24 h 的K562细胞，离心洗涤1次，用FCS-1640培养液调至1×106cell /ml 的细胞悬液，取上述细胞悬液1 ml，加入100 μL FUdR(1×10-3mol/L，Hank’s 液配制)，185 kBq 125I-UdR，于37℃，CO2孵箱内标记4 h，标毕，用FCS-1640 培养液洗净游离的同位素并调节细胞浓度至1×105cell /ml 。用药组，每支放免塑料管取上述标记的K562细胞 0.1 ml ，分别加入不同浓度沙棘汁的FCS-1640培养液0.9 ml。对照组除不含沙棘汁外，其余相同。然后放入37℃，CO2孵箱内培养16 h，在终止培养前30 min，加入DNA酶和胰酶双酶混合液200 μL/管(0.05%DNA酶和0.25%胰酶各半)。培养结束取出，振荡，离心取上清液0.6 ml至另一只放免塑料管内，用γ-射线自动计数仪测定各管cpm值(每分钟放射性强度)结果以细胞DNA中UdR释放率表示。
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2 结果
2.1 沙棘汁对HL-60细胞和YAC-1细胞的DNA合成有抑制作用；附表说明沙棘汁不但对人的白血病细胞有抑制DNA合成的作用，而且对小鼠的白血病细胞DNA合成也有抑制作用。
2.2 沙棘汁对K562细胞DNA中UdR的释放作用；用125I-UdR标记的K562细胞，经0.37 mg/ml、0.18 mg/ml 、0.09 mg/ml的HRJ共同培育后，UdR释放率似有随着HRJ剂量增加而增高的趋势。在0.18 mg/ml和0.09 mg/ml两剂量组释放率明显高于对照组(P[3-5]。据报道沙棘汁富含维生素C和E,沙棘中还含有大量的黄酮类物质，沙棘总黄酮具有可激活机体免疫功能等活性[4]。沙棘汁对致癌物N-二甲基甲硝胺在大鼠体内合成及诱发癌症的发生起阻断作用，而这种效应与维生素C和E的含量是密切相关的。藤晓萍等也报道了沙棘籽油可抑制肿瘤生长并可激活机体免疫功能，沙棘籽油也富含维生素E。故认为沙棘汁具有能抑制肿瘤生长(抑制DNA合成)、提高机体免疫功能的作用，这种作用与沙棘汁富含多种营养素有直接关系。
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02
本实验选择3种不同种类的白血病细胞，观察HRJ对白血病细胞的DNA解聚和DNA合成是否存在促进或抑制作用。从表1实验结果可知HRJ对HL-60和YAC-1细胞的DNA合成有明显的抑制作用，即对人和小鼠两种种系白血病细胞DNA合成均有抑制作用。结果证明HRJ明显增加了K562细胞DNA中的UdR释放率，说明HRJ对其细胞的DNA有解聚作用。
由此可见，HRJ对白血病细胞的杀伤作用机理，可能是HRJ对白血病细胞的DNA既有解聚作用，又有抑制其合成的作用。
参考文献
[1] 顾关云.沙棘的化学成分、生物活性与临床研究.国外医学植物药学分册，2007，22(4):139-149.
[2] 滕晓萍,殷淑蛾,刘世萍,等.复方沙棘养血膏辅助肿瘤化疗的实验研究及初步临床观察.中医药信息.2002，19(1): 47-48.
[3] 章平，毛玉昌，孙斌,等.沙棘籽渣黄酮诱导人乳腺癌细胞凋亡相关基因的表达谱变化癌症.2005，24(4):454-460.
[4] 滕晓萍，王宏昊，崔晓兰,等.沙棘复方制剂的药理作用研究.国际沙棘研究与开发.2007，5(4):6-10.
[5] 徐晓芸，潘思轶，谢笔钧,等.沙棘原花青素对应激性胃溃疡大鼠上皮细胞凋亡与增殖的影响.中国药理学通报，2006，22(11):1329-1333., 百拇医药(罗 昕)