妊高征与血管紧张素转换酶基因多态性的相关性研究
【摘要】 目的探讨妊娠期高血压综合征(pregnancy-induced hypertension,PIH)与血管紧张素转换酶(ACE)基因多态性的关系。 方法运用多聚酶链反应技术检测61例PIH患者及胎儿和70例正常妊娠妇女及胎儿血管紧张素转换酶基因多态。 结果妊娠妇女两组中DD型、ID型Ⅱ型基因频率分别比较,D型等位基因分别比较差异有统计学意义；胎儿两组中DD型、ID型Ⅱ型基因频率分别比较,D型等位基因分别比较均无统计学差异。 结论PIH患者ACE基因多态性与PIH的发病有关；PIH胎儿ACE基因多态性与PIH的发病无关。
【关键词】妊娠期高血压综合征; 血管紧张素转换酶;基因;多态性
妊高血压综合征(PIH)是妊娠晚期所特有的多因素、多系统疾病,发病率高,是导致孕产妇及围生期死亡的主要疾病之一[1]。目前,其病因和发病机制还不清楚。近年来，研究发现血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE) 水平与ACE基因的缺失、插入多态性密切相关[2]。胎儿与母体是两个独立的个体，胎儿通过脐带接受营养和排泄废物，脐带内含有丰富的胎儿血液，携带胎儿的多种信息。临床上，HDCP在终止妊娠后病情好转，症状消失；即使胎死宫内也会使症状、体征迅速减轻至消失[3]。因此,我们对孕妇及胎儿ACE基因多态性与HDCP的关系进行了初步探讨。
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1 资料和方法
1.1 资料来源及分组 妊高征组：61例，为本院1996年12月至1997年8月间收治的PIH患者，平均(27.5±3.7)岁,孕周为(38.8±4.6)周,入选标准:连续测量非同日血压3次,收缩压平均值≥140 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)和(或)舒张压平均值≥90 mm Hg,经询问病史和化验检查除外原发性高血压、糖尿病、肾病患者。对照组：70例，为晚期妊娠孕妇，经检查孕期无高血压、糖尿病、肾病,平均(27.8±8.9)岁,孕周为(39.5±2.7)周。
1.2 方法 DNA提取：采用周围血白细胞基因组DNA酚/氯仿法提取。按Rigat设计的聚合酶链反应(PCR)方法确定ACE基因型：引物A：5′-CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT-3′引物B：5′-GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3′(华美公司合成)，用PCR扩增仪(华美公司生产)进行DNA扩增,初期94℃变性60 s、35个周期，退火58℃ 1 min，74℃延伸8 min。将PCR产物在2%琼脂凝胶上电泳，观察结果。
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1.3 数据处理 采用SAS软件(6.03版本)，计算两组组ACE基因的基因型频率。由基因型计算两组等位基因频率。组间频率比较用2×3表示，采 χ2检验。
2 结果
ACE基因按是否有插入顺序分为Ⅱ型(PCR产物为490 bp，纯合子)、DD型(PCR产物为190 bp，纯合子)、ID型(杂合子)。两组年龄、孕周、血浆胆固醇水平无统计学差异。对照组ACE基因型II、ID、DD的频率分别是0.47、0.34和0.19，等位基因I、D的频率为0.62、0.38。PIH组ACE基因型II、ID、DD的频率分别是0.25、0.50和0.25，等位基因I、D的频率为0.50、0.50。PIH组ID、DD型基因的频率高于对照组( P
3 讨论
近年来，国内外关于PIH的病因研究包括钙代谢异常、洋地黄类因子含量增高、前列环素合成障碍、高胰岛素血症、心钠素和内皮素含量增高等，但这些因素只能部分解释PIH发生的病理生理。李进等发现，PIH患者血浆ACE的活性高于正常孕妇，而且孕妇的平均动脉压与血浆ACE活性成正相关。提示，ACE活性增高参与了PIH的发生。ACE的活性是由ACE基因决定的，II型者血浆ACE含量最低，ID者居中，DD型最高。本研究结果提示，PIH组ID、DD型基因频率、D等位基因频率明显高于对照组，ACE基因的ID、DD型基因与PIH的发生有密切关系。
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人类ACE基因位于17号染色体长臂2区3带(17q23)，有26个外显子和25个内含子[4]，目前已发现多种ACE基因多态标志，其中对第16内含子中存在的287 bp研究最多，呈现ACE基因D/I多态性.人类ACE基因有D,I两种等位基因和DD型(纯合子)、II型(纯合子)和D/I(杂合子)3种基因型[4].国内外对ACE基因D/I 多态性与HDCP发病的关系的研究结果不一 [4-6]。在实验中,ACE位点基因型频率与等位基因频率比较，在正常孕妇组和HDCP组之间有统计学差异。表明孕妇ACE基因的缺失多态性与HDCP组发病有关，这与国内外一些报道一致[5-8]。ACE位点基因型频率与等位基因频率比较，在正常脐血组和HDCP组之间无统计学差异,表明胎儿ACE 基因的缺失多态性与HDCP组发病无关。
ACE的底物是非特异的，它既可使血管紧张素I(AngI)转换为血管紧张素II(AngII)，又可使缓激肽灭活。缓激肽促进花生四烯酸生成前列腺素I2(PGI2)和前列腺素E2(PGE2)，后者也使血管扩张，已证实ACE是最强的激肽灭活剂，使缓激肽降解进而使PGI2、PGE2合成障碍，但血栓素A2(TXA2)的合成并未减少，致PGI2/TXA2比值减小，外周血管阻力增加，血凝异常，胎儿-胎盘间血流减少，促使妊高征的发生。
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我们的研究证明，ACE基因的ID、DD型基因是PIH的高危因素，因此建议在妊娠妇女中进行ACE基因检查，以筛选高危人群，对PIH进行一级预防。
参考文献
[1]乐杰.妇产科学.人民卫生出版社,2004:97-106.
[2] Scharplatz M,Puhan MA,Steurer J,et al.What is the impact of the ACE gene insertion/deletion (I/D) polymorphism on the clinical effectiveness and adverse events of ACE inhibitors Protocol of a systematic review.BMC Med Genet,2004,5:23.
[3] Granger JP,Alexander BT,Llinas MT,et al.Pathophysiology of hypertension during preeclampsia linking placental ischemia with endothelial dysfunction .Hypertension,2001,38(3Pt2):718-722.
, http://www.100md.com
[4] Galao AO,de Souza LH,da Ccosta BE,et al.Angiotensin-converting enzyme gene polymorphism in preeclampsia and normal pregnancy.Am J Obstet Gynecol,2004,191(3):821-824.
[5] Choi H,Kang JY,Yoon HS,et al.Association of Angiotensin-converting enzyme and angiotensinogen gene polymorphisms with preeclampsia.J Korean Med Sci,2004,19(2):253-257.
[6] Kaur R,Jain V,Khuller M,et al.Association of angiotensin-converting enzyme gene polymorphism with pregnancy-induced hypertension.Acta Obstet Gynecol Scand,2005,84(10):929-933.
[7] 陈柏坤,卓佳,周垒碧.妊娠高血压综合征患者血管紧张素转换酶基因多态性研究.检验医学,2006,21(1):39-41.
[8] 王筑,王海燕,杨峰,等.血管紧张素转换酶基因多态性与妊高征的遗传易感性研究.中国实用妇科与产科杂志,2004,20:183-184., 百拇医药(黄珍玉)
【关键词】妊娠期高血压综合征; 血管紧张素转换酶;基因;多态性
妊高血压综合征(PIH)是妊娠晚期所特有的多因素、多系统疾病,发病率高,是导致孕产妇及围生期死亡的主要疾病之一[1]。目前,其病因和发病机制还不清楚。近年来，研究发现血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE) 水平与ACE基因的缺失、插入多态性密切相关[2]。胎儿与母体是两个独立的个体，胎儿通过脐带接受营养和排泄废物，脐带内含有丰富的胎儿血液，携带胎儿的多种信息。临床上，HDCP在终止妊娠后病情好转，症状消失；即使胎死宫内也会使症状、体征迅速减轻至消失[3]。因此,我们对孕妇及胎儿ACE基因多态性与HDCP的关系进行了初步探讨。
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1 资料和方法
1.1 资料来源及分组 妊高征组：61例，为本院1996年12月至1997年8月间收治的PIH患者，平均(27.5±3.7)岁,孕周为(38.8±4.6)周,入选标准:连续测量非同日血压3次,收缩压平均值≥140 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)和(或)舒张压平均值≥90 mm Hg,经询问病史和化验检查除外原发性高血压、糖尿病、肾病患者。对照组：70例，为晚期妊娠孕妇，经检查孕期无高血压、糖尿病、肾病,平均(27.8±8.9)岁,孕周为(39.5±2.7)周。
1.2 方法 DNA提取：采用周围血白细胞基因组DNA酚/氯仿法提取。按Rigat设计的聚合酶链反应(PCR)方法确定ACE基因型：引物A：5′-CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT-3′引物B：5′-GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3′(华美公司合成)，用PCR扩增仪(华美公司生产)进行DNA扩增,初期94℃变性60 s、35个周期，退火58℃ 1 min，74℃延伸8 min。将PCR产物在2%琼脂凝胶上电泳，观察结果。
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1.3 数据处理 采用SAS软件(6.03版本)，计算两组组ACE基因的基因型频率。由基因型计算两组等位基因频率。组间频率比较用2×3表示，采 χ2检验。
2 结果
ACE基因按是否有插入顺序分为Ⅱ型(PCR产物为490 bp，纯合子)、DD型(PCR产物为190 bp，纯合子)、ID型(杂合子)。两组年龄、孕周、血浆胆固醇水平无统计学差异。对照组ACE基因型II、ID、DD的频率分别是0.47、0.34和0.19，等位基因I、D的频率为0.62、0.38。PIH组ACE基因型II、ID、DD的频率分别是0.25、0.50和0.25，等位基因I、D的频率为0.50、0.50。PIH组ID、DD型基因的频率高于对照组( P
3 讨论
近年来，国内外关于PIH的病因研究包括钙代谢异常、洋地黄类因子含量增高、前列环素合成障碍、高胰岛素血症、心钠素和内皮素含量增高等，但这些因素只能部分解释PIH发生的病理生理。李进等发现，PIH患者血浆ACE的活性高于正常孕妇，而且孕妇的平均动脉压与血浆ACE活性成正相关。提示，ACE活性增高参与了PIH的发生。ACE的活性是由ACE基因决定的，II型者血浆ACE含量最低，ID者居中，DD型最高。本研究结果提示，PIH组ID、DD型基因频率、D等位基因频率明显高于对照组，ACE基因的ID、DD型基因与PIH的发生有密切关系。
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人类ACE基因位于17号染色体长臂2区3带(17q23)，有26个外显子和25个内含子[4]，目前已发现多种ACE基因多态标志，其中对第16内含子中存在的287 bp研究最多，呈现ACE基因D/I多态性.人类ACE基因有D,I两种等位基因和DD型(纯合子)、II型(纯合子)和D/I(杂合子)3种基因型[4].国内外对ACE基因D/I 多态性与HDCP发病的关系的研究结果不一 [4-6]。在实验中,ACE位点基因型频率与等位基因频率比较，在正常孕妇组和HDCP组之间有统计学差异。表明孕妇ACE基因的缺失多态性与HDCP组发病有关，这与国内外一些报道一致[5-8]。ACE位点基因型频率与等位基因频率比较，在正常脐血组和HDCP组之间无统计学差异,表明胎儿ACE 基因的缺失多态性与HDCP组发病无关。
ACE的底物是非特异的，它既可使血管紧张素I(AngI)转换为血管紧张素II(AngII)，又可使缓激肽灭活。缓激肽促进花生四烯酸生成前列腺素I2(PGI2)和前列腺素E2(PGE2)，后者也使血管扩张，已证实ACE是最强的激肽灭活剂，使缓激肽降解进而使PGI2、PGE2合成障碍，但血栓素A2(TXA2)的合成并未减少，致PGI2/TXA2比值减小，外周血管阻力增加，血凝异常，胎儿-胎盘间血流减少，促使妊高征的发生。
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我们的研究证明，ACE基因的ID、DD型基因是PIH的高危因素，因此建议在妊娠妇女中进行ACE基因检查，以筛选高危人群，对PIH进行一级预防。
参考文献
[1]乐杰.妇产科学.人民卫生出版社,2004:97-106.
[2] Scharplatz M,Puhan MA,Steurer J,et al.What is the impact of the ACE gene insertion/deletion (I/D) polymorphism on the clinical effectiveness and adverse events of ACE inhibitors Protocol of a systematic review.BMC Med Genet,2004,5:23.
[3] Granger JP,Alexander BT,Llinas MT,et al.Pathophysiology of hypertension during preeclampsia linking placental ischemia with endothelial dysfunction .Hypertension,2001,38(3Pt2):718-722.
, http://www.100md.com
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[6] Kaur R,Jain V,Khuller M,et al.Association of angiotensin-converting enzyme gene polymorphism with pregnancy-induced hypertension.Acta Obstet Gynecol Scand,2005,84(10):929-933.
[7] 陈柏坤,卓佳,周垒碧.妊娠高血压综合征患者血管紧张素转换酶基因多态性研究.检验医学,2006,21(1):39-41.
[8] 王筑,王海燕,杨峰,等.血管紧张素转换酶基因多态性与妊高征的遗传易感性研究.中国实用妇科与产科杂志,2004,20:183-184., 百拇医药(黄珍玉)