高糖对体外培养的人脐静脉内皮细胞中c-fos的影响研究(2)
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3.2 高糖对c-fos 基因表达的影响
3.2.1 总RNA的鉴定 总RNA提取产物在紫外分光光度计下测A260/A280的OD比值在1.8~2.0之间。经1.0%琼脂糖凝胶电泳,紫外透射仪下可见2条清晰的条带,分别28 s、18 s,且28 s/18 s>1.5,示RNA无明显降解。
3.2.2 c-fos在HUVECs中的转录 PCR扩增后的产物经1.8%琼脂糖凝胶电泳,EB染色后于凝胶图像分析系统摄像,进行灰度分析,结果见下图1、2,c-fos和GAPDH扩增片段分别为150 bp和420 bp,与理论设计相符。
图1 不同处理因素对c-fos mRNA转录的影响
图2 22 mmol/L Glu作用不同时间c-fos mRNA转录
3.2.3 葡萄糖浓度对c-fos mRNA转录的影响 选取5.5 mmol/L、11 mmol/L、22 mmol/L、44 mmol/L浓度组以观察葡萄糖对c-fos基因转录的浓度影响。从图1可以看出,各组GAPDH mRNA水平相差不大,但c-fos mRNA的量从5.5~22 mmol/L随葡萄糖浓度增加而逐渐增高(P<0.01),22 mmol/L组达最高峰。其c-fos/GAPDH mRNA比值见表1。
表1
葡萄糖浓度对c-fos mRNA转录的影响(n=3)
Groups c-fos/GAPDH mRNA Ratio
5.5 mmol/L(Con)0.815±0.043#
11 mmol/L1.016±0.053*#
22 mmol/L1.508±0.127*
44 mmol/L1.489±0.072*
注:*P<0.01 compared with 5.5 mmol/L Glu group ......
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