三羟基异黄酮对肝纤维化大鼠血清和肝组织中TGF-β1表达的影响(2)
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1.2.3 病理学检查 肝组织经10%甲醛固定,石蜡包埋,做常规组织切片,HE染色,观察。
1.2.4 免疫组织化学检测TGF-β1表达 石蜡包埋常规组织切片经二甲苯脱蜡,梯度酒精水化。然后将脱蜡水化后的组织切片放入已沸腾的柠檬酸缓冲液中进行酸化修复。取出玻片,先用自来水冲洗后,置放于卵育盒中。PBS冲洗3次,每次间隔3 min,除去PBS液。每张切片加1滴3%过氧化氢,室温下孵育10 min。PBS冲洗3次,每次间隔3 min,除去PBS液。每张切片加50μl的TGFβ1兔抗大鼠多克隆抗体,在4℃温度下孵育过夜。PBS冲洗3次,每次间隔3 min。除去PBS液,每张切片加50μl MaxvisionTM抗兔-HRP检测试剂盒,室温下孵育15 min。PBS冲洗3次,每次间隔3 min,除去PBS液。每张切片加50μl新鲜配制的DAB溶液显色观察。自来水冲洗,苏木素复染30 s,自来水冲洗,返蓝。切片经梯度酒精脱水干燥、中性树胶封固。在OLYMPUS倒置金相显微镜(GX51)的全自动图像分析系统上,每张切片随机选取10个视野(×100倍)测定阳性细胞面积百分比(阳性着色面积百分比=阳性着色面积/肝组织面积×100%),平均值越大表明组织中该抗原含量越高,据此分析TGF-β1的表达。
1.2.5 统计学分析 应用SPSS 13.0软件进行统计分析。数据均以x±s表示,组间比较采用t检验, 以P<0.05为有统计学差异。
2 结果
2.1 Genistein对CCl4诱导的模型大鼠血清ALT、AST、TGF-β1和Ⅰ型胶原的影响结果见表1。 与正常组相比, 肝纤维化模型大鼠血清ALT、AST、TGF-β1和Ⅰ型胶原明显升高(P<0.05);与模型组相比,Genistein治疗组(50、100 mg/kg)和阳性对照组的ALT、AST、TGF-β1和Ⅰ型胶原明显下降(P<0 ......
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