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编号:12159024
高血压脑出血与ACE基因多态性相关性
http://www.100md.com 2011年9月25日 郎晓峰
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    参见附件(2480KB,2页)。

     作者单位:130051长春市中心医院高血压脑出血是临床的常见病、多发病,并且发病呈年轻化趋势,部分有家族聚集倾向,从分子水平研究该病的病因学及发病机理,有着十分重要的意义。

    血管紧张素转换酶基因就是值得注意的一个基因。该基因位于17号染色体的2区3带(17q23),在ACE基因的第16内含子中有一种Alu重复序列的插入(I,insertion)和缺失(D,deletion)的多态性[1],其长度约为287bp。近来对血管紧张素转换酶(angiotensinconngenzyme,ACE)基因多态性与疾病的关联进行了多种研究,发现ACE基因多态性与许多心血管疾病有关[2],但是它与脑出血的关联报道较少。本课题的研究目的是探讨高血压脑出血与血管紧张素转换酶(ACE)基因的关系。

    1对象和方法

    11研究对象正常对照组168名,平均年龄(487±55)岁,经详细的病史询问、体格检查及胸片、标准十二导联心电图、肝胆B超、血、尿、粪常规、血生化检查,均为体检健康者;高血压组153名,平均年龄(503±07)岁;高血压脑出血组112名,年龄(490±08)岁,脑出血由高血压引起(有高血压病史,就诊时有高血压),并经头颅CT扫描证实。

    12基因组DNA抽提及体外扩增抽周围静脉血4 ml,用酚、氯仿抽提法提取基因组DNA,采用PCR扩增ACE基因的特异片段。引物参照文献设计,由沈阳联星生物公司合成,其核苷酸序列如下:

    引物A: 5′CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT3′

    引物B: 5′GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT3′

    PCR反应体系为50 μl,模板DNA约300 ng,引物A和B各10pmol,05 mmol dNTPs和1UTaqDNA聚合酶。在PCR热循环仪上扩增,94℃变性1 min,58℃退火1 min,72℃延伸5 min,共30个循环。

    13PCR扩增产物的多态性分析信号肽序列的插入/缺失多态性(I/D)片段以2%凝胶电泳(含溴化乙锭05 μg/ml),经100V 20 min,在紫外光下观察、摄影。

    14SACE活性测定试剂盒由北京海军总医院中心实验室提供。

    15统计学方法用基因计数方法计算正常人的基因型和等位基因频率,用χ2检验及HardyWeinberg平衡法评估标本的群体代表性。组间等位基因及基因型频率的差异用χ2检验;SACE活性的数据用均值±标准差(x±s)表示,比较差异用显著性t检验。

    2结果

    21ACE基因型图1中可见ACE I/D多态性PCR产物的三种类型:泳道Ⅲ只有单一190 bp基因片段(D),为DD纯合子;泳道Ⅰ只有单一490 bp基因片段(Ⅰ),为Ⅱ纯合子;泳道Ⅱ有190 bp(D)和490 bp(I)两条片段,为ID杂合子。

    22ACE基因型与等位基因频率如表1所示,168名正常人中(Ⅰ组),DD型27名,ID型89名,Ⅱ型52名;112名高血压脑出血患者中(Ⅱ组),DD型58名,ID型29名,Ⅱ型25名;153名高血压无脑出血病史的患者中(Ⅲ组),DD型56名,ID型61名,Ⅱ型36名,三组基因型频率和等位基因的频率如表所示。Ⅱ组与另外两组比较显示:基因型分布有显著性差异,等位基因分布与Ⅰ组、Ⅲ组比较结果不同。

    表1ACE基因型和等位基因在不同组间的分布

    组别例数基因型等位基因DDIDIIID正常对照组(Ⅰ组)16827(0159)89(0527)52(0307)143(0426)193(0574)高血压脑出血组(Ⅱ组)11258(0518)29(0259)25(0223)79(0353)145(0647)高血压无脑出血组(Ⅲ组)15356(0366)61(0399)36(0235)173(0565)133(0435)注:以上三组比较

    基因型分布:D与I:DD与非DD:Ⅱ比Ⅰ,χ2=3391,P<0005;Ⅱ比Ⅰ,χ2=336,P>005;Ⅱ比Ⅰ,χ2=406,P<0005;Ⅱ比Ⅲ,χ2=6625,P<005;Ⅱ比Ⅲ,χ2=2332,P<0005;Ⅱ比Ⅲ,χ2=583,P<00523三组ACE基因型的血清ACE活性如表2所示,三组不同基因型的ACE活性比较,DD基因型的ACE活性高于I D、I I基因型,差异具有显著性意义,不同基因型之间SACE的活性不同。

    Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组之间比较SACE的活性无显著性差异。

    表2ACE基因型与血清ACE活性的关系(x±s,U/L)

    组别例数基因型DDIDII正常对照组(Ⅰ组)1683324±9102896±6652414±569高血压脑出血组(Ⅱ组)1123493±9302919±6572525±517高血压无脑出血组(Ⅲ组)1533417±8762799±6342472±527注:三组不同基因型的ACE活性比较,分别进行两组间均数比较的t检验,P<005;Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组进行比较,P>005

    3讨论

    血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme, ACE)是肾素血管紧张素系统的关键酶,在机体血压、水电解质稳态、免疫、生殖以及神经传导调节等方面起着重要的作用。近年来国内外研究发现ACE基因多态性与多种疾病的发生和发展有关。

    我们用PCR方法,通过比较正常对照组、高血压脑出血组、高血压无脑出血病史组的ACE基因分布,研究了ACE基因多态性与高血压脑出血的相关性。

    伴高血压的脑出血患者的DD基因型和D等位基因频率明显高于无脑出血的高血压患者;无脑出血史的高血压患者DD基因频率明显高于正常对照组,但是该组D等位基因频率低于正常对照组和高血压的脑出血组,这说明DD基因型在高血压脑出血的发病机制中起一定作用,而D等位基因的作用还需要进一步探讨,因为D等位基因频率与DD、ID两种基因型有关,基因频率的计算结果受两种基因型的影响。基于以上这种相关性,在人群中尤其是在高血压患者中进行ACE基因调查,可及早发现高危脑出血人群,对防治脑出血有十分积极的意义,DD基因型的高血压患者具有脑出血易感性 ......

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