HG-原子荧光光谱法测定粮食中的总硒
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作者单位：130062吉林省长春市绿园区疾病预防控制中心(战桂娟)；吉林省疾病预防控制中心(边疆)
微量元素硒在医学领域有着十分重要的生物学意义，人体摄入硒的不足或过量会导致疾病的发生，据文献克山病和大骨节病的发生同低硒有密切关系，所以微量硒的准确测定为医学界所重视[1-2]。一般常用的测定硒的方法有分子荧光法、原子吸收分光光度法等[3]。氢化物原子荧光法(HG-AFS)是利用特征辐射源激发待测元素原子并测量其荧光强度的新型分析技术。近几年来，在卫生理化检验领域开始采用其分析技术。本文利用该方法测定粮食中的硒，其方法简便、快速、准确取得了较满意的结果。
1 实验方法
1.1 原理
样品经消化后，与硼氢化钾和酸所产生的新生态氢生成硒的氢化物，由氢气载气导入石英炉原子化器，使其原子化。在硒特种空心阴极灯激发下，产生原子荧光，测定其荧光强度并与标准系列比较而测出样品中硒含量。
1.2 试剂与仪器
1.2.1 仪器
AFS-230E型双道原子荧光光谱仪(北京海光仪器公司)；硒特种空心阴极灯(北京有色金属研究院)。
1.2.2 试剂
1%硼氢化钾溶液(1 g硼氢化钾溶于100 ml 0.5%氢氧化钾溶液中，用时现配)；硝酸(GR)；硒储备溶液(1 mg/ml)国家标准物质中心；硒标准溶液(100 mg/ml)由硒储备溶液配制而成；盐酸(GR)；过氧化氢(AR)。
1.3 标准系列溶液的配制
在10 ml比色管中分别加入0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00 ml硒标准液(100 ng/ ml)。用少量去离子水稀释后，加入浓盐酸2.00 ml，用水稀释至刻度，摇匀，备用，其浓度分别为1.00、2.00、4.00、6.00、8.00和10.0 ng/ ml。
1.4 样品处理
称取0.25 g左右样品于聚四氟乙烯内管中，加入2.50 ml浓硝酸，摇匀浸泡过夜。再加入过氧化氢1 ml。盖好内盖，旋紧不锈钢外套，放入恒温干燥箱，140℃保持4 h，在箱内自然冷却至室温。取出后放入烧杯中，再加入5 ml 6 mol/L盐酸，置于电热板上加热，继续加热至溶液变为无色透明并伴有白烟出现，以完全将六价硒还原四价硒。冷却，转移10 ml比色管中，同时做空白试验。
1.5 测定
按本方法所确定的仪器最佳测试条件，将标准系列的浓度及样品参数等输入计算机程序后，进行标准溶液及未知样品的测定。
2 结果与讨论
通过试验，确定仪器最佳测试条件如下： 灯电流，80 mA；负高压，300 V；原子化温度，200℃；原子化器高度，8.0 mm；载气流速，400 ml/min；屏蔽气流速，1000 m1/min；读数时间，11 s；延迟时间，0 s；测定方式，标准曲线法，读数方式；峰面积。
2.1 还原剂浓度的确定
经实验表明：当硼氢化钾浓度小于0.5%时，荧光强度较低；当硼氢化钾的浓度达到0.5%时，荧光强度迅速增加；硼氢化钾浓度>0.7%时，荧光强度增加趋于平缓；硼氢化钾浓度达到1.0%时，荧光强度最大，且其变化相对最小；如再继续增加硼氢化钾浓度，则将产生大量剩余气体，冲淡了硒氢化物的浓度，降低了气态原子的密度，荧光强度缓慢降低。因此确定还原剂硼氢化钾浓度为1.0%。
2.2 酸度的确定
氢化物的形成与两个因素有关，一是被测元素与新生态氢的化合速度；另外是硼氢化钾在酸性溶液中分解时产生新生态氢的速度。硼氢化钾在酸性介质中的反应为：BH-4+ H+ +3H20→H3BO3+ 4H20。当硼氢化钾溶液浓度一定时，硼氢化钾的分解速度与氢离子的浓度有关，即与硼氢化钾所处的酸性介质有关。当氢离子的浓度较小时，硼氢化钾的分解速度随着氢离子浓度的增加而加快，荧光强度迅速提高；当氢离子的浓度达到25%时，荧光强度达最大值，但随着氢离子浓度的进一步加大，所产生的氢气冲淡了硒氢化合物浓度，反而导致荧光强度下降。为保持其稳定，本实验确定酸度为25%。
2.3 线性范围、标准曲线及最低检出限 在本实验条件下，针对样品中硒含量水平，选择了1.00~10.0 ng/ml范围内进行测定，其标准曲线的回归方程为：Y= 494.8ρ+ 1.68；相关系数为0. 999 7；最低检出限为0.06 ng/ml。
2.4 回收率试验
在粮食中分别添加25、100、400 ng硒标准，按本法进行三浓度水平三平行回收率试验，回收率在94.5%~101 ......
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