牛蒡子苷元对人食管癌细胞增殖细胞核抗原表达及细胞周期影响的研究(1)
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【摘要】 目的 观察牛蒡子苷元(arctigenin ARG)对体外培养的人食管癌细胞 (esophageal cancer ,1 cells, EC,1) 增殖和增殖细胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen, PCNA)表达及细胞周期的影响。方法 将不同浓度的ARG作用于EC,1，噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium MTT)实验检测细胞增殖抑制率、流式细胞术测定细胞周期变化，免疫组织化学法测定PCNA表达水平。结果 与对照组比较，ARG对EC,1细胞生长有抑制作用，随着时间/浓度的增加抑制作用逐渐增强(P<0.05)；牛蒡子苷元可抑制EC,1由G0/G1 向S期转换，G0/G1期细胞百分率较对照组显著增加，S期细胞百分率显著降低；随ARG浓度增加EC,1内PCNA表达水平逐渐降低。结论 ARG有抑制EC,1增殖，下调EC,1内PCNA表达水平，阻滞细胞周期的作用。
【关键词】 牛蒡子苷元；人食管癌细胞；细胞增殖；细胞周期
Effects of arctigenin on PCNA expression and cell cycling in human Human Esophageal Cancer Cells MA Hong,de. The First Hospital of Pingdingshan city, Henan 467012,China
【Abstract】 Objective To investigate the effects of ARG on PCNA expression and cell cycling in invitro cultured esophageal cancer ,1 cells Methods EC,1 cells were treated with different concentration ARG.Proliferation of EC,1 cell inhibited by ARG were assessed by MTT.The cell cycle was measured using flow cytometry(FCM)，and the level of proliferating cell nuclear antigen(PCNA)with immunohistochemistry(IHC).Results ARG could inhibit the growth and significantly suppressed expression of PCNA of EC,1 cells in a dose/time dependent manner(P<0.05). G0/G1 to S phase transition was blocked after treated with ARG，the percentage of G1 phase of the cell cycle was significantly increased, whereas the percentage of S phase was remarkably decreased. Conclusion The findings suggested the ARG could inhibit the growth and expression of PCNA， and retarded cell cycle of EC,1.
【Key words】 Arctigenin；Esophageal cancer ,1；Cell proliferation；Cell cycle
食管癌为常见病，严重威胁人民的健康，其确切发生机制尚未明了，晚期肿瘤仍缺乏有效治疗手段。近年来发现中药抗肿瘤有一定优势，近来研究表明牛蒡子具有抗恶性肿瘤细胞活性[1],牛蒡子主要药用成分为牛蒡子苷、牛蒡子苷元(ARG)及牛蒡子酚A、B等，其中起抗肿瘤作用的主要活性成分为ARG[2]。牛蒡子苷元可抑制肝癌细胞增殖[3], 而对人食管癌细胞的影响报道极少，本文初步观察ARG对体外培养的EC,1 增殖抑制和PCNA表达及细胞周期的影响，为更好地开发牛蒡子的药用价值提供理论与实验依据。
1 材料与方法
1.1 材料 与仪器 EC,1(郑州大学病理实验室提供)，ARG(上海融禾医药科技发展有限公司)；RPMI1640培养液，胎牛血清；免疫组化试剂盒；酶标仪、流式细胞仪。
1.2 方法
1.2.1 细胞培养 将EC,1接种于RPMI1640培养液中(含10%胎牛血清、100 U/ml青霉素和100 U /ml链霉素)，于37℃，5%CO2培养箱中培养。2~3 d传代后，取生长对数期细胞用于实验。
1.2.2 MTT法检测细胞增殖抑制率 取对数生长期EC,1细胞常规消化，用RPMI,1640配成单细胞悬液，以每孔104～105个细胞接种于96孔培养板中，常规培养24 h细胞大部分已贴壁，吸出原培养液，实验组加用含不同浓度ARG的培养液 ......
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