性激素在肝癌发生中作用的动物实验(2)
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参见附件。
1.2 诱发大鼠肝癌模型制作 用清洁级SD大鼠80只，体重(170±30)g，购自中山大学实验动物中心，均为雌性，所有大鼠分笼饲养，采用标准化光照，自由进食，定期换垫料，适应环境7 d。饲料、垫料等都经过消毒灭菌处理。将大鼠随机分为4组，每组20 只，第一组为对照组，饮常水，正常喂食；其余3组饮含药物水, 自由饮用, 液体隔日更换, 14周后停用药物，改饮常水，在3组中分别加服用已烯雌酚、甲睾酮和甲孕酮。
第12、16、18、20和24周处理4只大鼠。打开腹腔，大体观察暴露肝脏，记录肝脏的形态、颜色、质地。取肝脏标本，4%聚甲醛缓冲液固定24 h，常规石蜡包埋，切片，HE染色，光学显微镜下观察。
2 结果
2.1 一般情况 诱癌4周后，实验组Wistar大鼠进食量下降，并逐步出现毛色枯燥、发黄、无光泽，行动迟缓，体重较对照组增长缓慢，有些大鼠体重明显偏低。自诱癌第8周末，实验组大鼠开始出现死亡，但是3组死亡情况分别为：雌激素组2只(10%)，雄激素组5只(25%)，孕激素组3只(15%)。对照组大鼠均生长良好，未见明显病态表现。3之间死亡率具有显著性差异性( P >0.05)。
2.2 大鼠肝脏病理学改变 10～15周为大鼠的肝硬化期，大体标本：肉眼可见肝表面及切面可见1～2 mm左右的白色颗粒状结节,镜下为肝硬化结节。第17～20周为大鼠的癌变期，大体标本的肝表面及肝切面可见3～25 mm的结节，镜下呈癌组织改变。各组结果详见表1。
3 讨论
DEN为国际肿瘤研究中心机构(International agency for research on cancer,IARC)确定的致癌物质，对肿瘤的发生具有启动和促进的双重作用。本研究结果证实应用DEN诱发大鼠肝癌模型可靠性。但是由于DENA的毒性作用,使部分大鼠肝细胞死于肺部感染或肝癌组织破裂出血。DENA诱癌过程中形态与病理变化特征，可以分为4个阶段[1]。第一阶段为肝硬变前期，为诱癌第1～8周；第二阶段为肝硬变期，为诱癌第8～14周；第三阶段为早期癌变期，为诱癌第14～18周；第四阶段为演进期，为诱癌的第18～20周。
关于性激素在肝癌发生中作用目前尚无定论。周载平等[2]认为肝癌癌变特定阶段雄激素受体表达活跃，AR水平呈现自癌瘤到癌周组织的区域性递减变化，提示其可能有介导雄激素的促肝细胞异常增殖作用。动物试验及临床研究证明，雄性激素能诱导肝癌，肝硬化和肝癌患者中存在雄性激素异常。雄激素和AR参与肝癌细胞表达的调控[3]。对患上慢性肝炎、但还未发展成为癌症的1岁老鼠进行阉割，将会起到保护作用。给老鼠注入一种强力男性激素，来观察其是否会促进肿瘤发展。结果，这两种方法都没有奏效，这也证明了男性性激素，如睾丸激素，并不会直接促进成鼠患上肝癌。这项研究是首次在基因组范围研究性别对非生殖器官癌的影响，这项研究的结果刊登在2007年12月15日的《癌症研究》杂志上。
也有文献认为肝癌的发生、发展及生物学特性可能与肝癌组织中ER、ERβ的阳性表达降低、变异或缺失有关,男性肝癌组织中的ER较易发生变异或缺失，ERa基因多态性与原发性肝癌有关,P等位基因可能是其保护因素,X等位基因可能是其危险因素，ERδ5作为显性阴性突变体，在肝癌细胞中直接抑制ERα的转录活性[4-6]。Nagasue[7]分别对25例肝癌伴肝硬化、肝硬化患者血浆E1、E2、E3、T水平检测，未发现组间明显差异，但E/T的比值却存在明显差异，说明E与T比例失衡与HCC发生有一定关。肝癌癌变过程中，雌激素受体发生缺失，肝癌受体正常功能的丧失可能与肝癌的发生发展相关[8]。Henryk[9]报道雌激素加致癌物NUM(N2]nitrosomorpholine)，对于卵巢切除后的雌性小鼠，引起肝结节增生占23/31，发展成肝细胞性肝癌(HCC)占9/31，仅用NUM引起肝结节增生与HCC各占11/31，3/31；仅用雌激素则不会引起肝细胞增生，更不会引导起HCC，提示雌孕激素在HCC复制中仅起一定的促进作用。 肝癌患者给予雌激素治疗并不能取得良好的效果[10]。
本研究显示：雌激素组、雄激素组和孕激素组肝癌发生率分别为：30%、85%和55%，3组肝癌发生率具有显著性差异( P <0.05)。雌激素组第18周仍有大部分为肝硬化。而雄激素组第12周即可见部分大鼠已经出现肝癌，第16～18周的均已经癌变。孕激素组介于上述两组之间。提示雌激素在大鼠肝癌诱发过程中具有抑制作用，而雄激素则有促进作用。
作者认为：①雌激素在肝癌的发生中具有较强抑制作用，是一个保护因子。②孕激素在肝癌的发生中起抑制作用，是一个保护因子。③肝癌是一个雄激素依赖性肝癌，雄激素在肝癌的发生中起促进作用，是一个危险因子。但是三种激素均不是诱发肝癌独立因素或主要因素。
参 考 文 献
[1] 党双锁,袁利超.肝癌动物模型的研究现状.世界最新医学信息文摘, 2004,3(1):968-970.
[2] 周载平,梁力建.实验性肝癌雄激素受体表达的病理意义.实用癌症杂志,2001,16(6):578-580.
[3] 李超群,史毅,熊洁,等.雄激素和雄激素受体对肝癌细胞株PEG10表达的作用.肝脏, 2006, 4:252-255.
[4] 王雷永,毛羽, 郁正亚,等.人肝细胞癌中雌激素受体及其亚型的表达与临床意义.腹部外科,2007,20(6):47-49.
[5] 张伟,时德,杜成友,等.雌激素受体a 基因多态性与原发性肝癌的相关性研究.生物技术通报,2008,3:84-86.
[6] 韩聚强, 袁斌,丁丽华,等.肝癌细胞雌激素受体显性阴性突变体ERδ5基因的分离及生物学功能分析 ......
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