复方丹参片微生物限度检查方法学的研究
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【摘要】目的探索适合复方丹参片微生物限度检查方法，消除复方丹参片的微生物限度检查法中的抑菌作用。方法本文采用培养基稀释法与薄膜过滤法对细菌、霉菌和酵母菌进行试验，加试验菌回收并且计算回收率。结果薄膜过滤法回收率达到 70%以上。结论可用薄膜过滤法对复方丹参片进行微生物限度检查。
【关键词】
复方丹参片；微生物限度检查；方法学
复方丹参片属于中药复方制剂，临床用于心绞痛(冠心病)、高血压、颈椎病以及胸中憋闷等病症，处方中丹参和冰片两种中药材，均含有抑菌物质，对某些细菌的生长繁殖有一定的抑制作用，常规法和培养基稀释法不能有效检出该药品污染存活的细菌数量，结果不能准确反映该药品品种的微生物质量。根据《中国药典》2010 年版二部附录微生物限度检查法的规定[1]，参照近年来相关文献[2]，本文对该品种的微生物限度检查方法进行了方法学研究，通过研究，采用薄膜过滤法，可以消除药品中抑菌成分的干扰，准确检出药品中污染存活的细菌数量。
1仪器与材料
1.1仪器LS-B50L 立式灭菌锅；JJ200 电子天平；JT-B电动匀浆仪；MJX-250B-Z霉菌培养箱；SPX-250B-Z 生化培养箱；ZSD-A1160 生化培养箱；格兰仕微波炉；BJ-2 cD净化工作台；AC2-4S1 ESCO生物安全柜。
1.2培养基营养琼脂培养基 批号： 100408；玫瑰红钠培养基 批号：100921；营养肉汤培养基 批号：110406；胆盐乳糖增菌液 批号：110121；MUG培养基 批号：111012；pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液 批号：100603；曙红亚甲蓝琼脂培养基 批号：1011222生产单位：北京三药科技开发公司。
1.3验证用菌种大肠埃希菌[CMCC(B)44102]；枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]；金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]；白色念珠菌[CMCC(F)98001]；黑曲霉菌[CMCC(F)98003]来源：中国食品药品检定研究院。
1.4菌液制备取经35℃培养18～24 h的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌与枯草芽孢杆菌肉汤液体培养物0.1 ml加入9 ml 0.9%氯化钠溶液中，10倍稀释至10.-4～10.-6约为50～100 cfu/ml，做活菌计数备用。取经25℃培养18～24 h的白色念珠菌液体培养物0.1 ml加入9 ml 0.9%氯化钠溶液中，10倍稀释至10.-4～10.-6约为50～100 cfu/ml，做活菌计数备用。取经培养一周的黑曲霉斜面培养物，加0.9%氯化钠溶液3 ml，洗下霉菌孢子，取0.1 ml加入9 ml 0.9%氯化钠溶液中，10倍稀释至10.-5～10.-7约为50～100 cfu/ml，做活菌计数备用。
2细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证
2.1供试液制备取本品10 g 置锥形瓶中，加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100 ml，以4000转/分开机1分，即为1：10的供试液。
2.2回收率测定
2.2.1供试品对照组①培养基稀释法：取1∶10的供试液2份，每份1 ml分别注入5个平皿中，倾注营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基各约15 ml，点计菌落数。②薄膜过滤法：取供试液1 ml过滤，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜2次 ......
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