1. 3 方法

    1. 3. 1 BALF的制备 取新鲜 BALF 10 ml， 经300目金属网过滤去掉杂质和痰液， 300 g， 5 min离心后弃上清， 再用含有0.5%牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液(PBS)洗2次， 取BALF 100 μl加入20 μl荧光抗体， 室温避光孵育20 min， 300 g， 5 min离心弃上清， 加 1∶9 配制的溶血素2 ml， 避光10 min， 200 g， 5 min离心弃上清液， 加入 PBS 缓冲液300 g， 5 min 离心， 弃上清， 加0.5 ml PBS重悬细胞上机待测。

    1. 3. 2 流式细胞仪测定 以荧光微球calibrite Beads 3-colour校准仪器光路使其分辨率达到最佳工作状态， 双色免疫荧光染色， 采用Simultest 软件， 三色荧光/侧向散射光设门(CD45-PerCP/SSC-Gating)， 设置淋巴细胞门并分析淋巴细胞免疫表型， 建立CD45-PerCP/SSC， FSC/SSC， SSC/CD3荧光点图， 用CD3细胞群圈门以排除巨噬细胞、碎片及其他成分的干扰 ......