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编号:12593466
髂内动脉灌注甲氨蝶呤在大鼠体内各组织药物浓度监测
http://www.100md.com 2015年7月15日 中国实用医药 2015年第20期
     【摘要】 目的 通过甲氨蝶呤(MTX)HPLC检测法, 对大鼠髂内动脉灌注MTX后血浆以及组织内药物浓度的变化进行检测, 为临床治疗提供可靠参考。方法 30只实验室培养的健康雌性SD大鼠, 随机分为对照组与观察组, 各15只。观察组按照3.0 mg/kg的剂量, 行髂内动脉注射MEX制剂;对照组以同样剂量髂内静脉注射MTX制剂。比较两组大鼠的实验效果。结果 两组大鼠肺组织、子宫以及卵巢药物浓度组间对比差异有统计学意义(P<0.05)。结论 通过髂内动脉灌注化疗药物, 能有效改善对子宫、卵巢组织的治疗效果, 临床应对此给予高度重视。

    【关键词】 甲氨蝶呤;动脉灌注;药物浓度

    本文通过对髂内动脉灌注MTX在大鼠体内各组织药物浓度监测, 探讨不同给药方式大鼠血浆与组织中药物动力学变化, 为进一步提高动脉给药的安全性与有效性略尽绵力。

    1 材料与方法
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    1. 1 材料 选取实验室培养的健康雌性SD大鼠30只, 随机将大鼠均分为对照组与观察组, 各15只。对照组大鼠体重250~350 mg, 平均体重(300.0±50.0)mg;对照组大鼠体重230~360 mg, 平均体重(295.0±55.0)mg。两组大鼠一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05), 具有可比性。

    1. 2 方法 观察组15只大鼠按照3.0 mg/kg的剂量, 行髂内动脉注射MEX制剂;对照组大鼠以同样剂量髂内静脉注射MTX制剂。具体操作为:给药前, 对所有大鼠进行1.0 g/kg的乌拉坦腹腔注射, 待麻醉后固定大鼠, 并装置SMUP-E型生物信号处理系统, 用于监测大鼠生命体征[1]。从大鼠下肢根部, 向腹股沟股动脉搏动处切开皮肤, 分离皮下组织后, 充分暴露股动脉与股静脉。实施股动脉、股静脉分离术后, 结扎股动脉远心端, 并于近心端插管。灌注给药后结扎动脉残端并缝合伤口。手术结束后, 将大鼠放入恒温箱内, 保持体温。

    检测方法:心、肺、子宫组织解冻后精确称重。按照1 g/ml的标准, 折算成体积后, 按照1:2的比例加入重蒸水充分混合, 捣成组织匀浆, 记录匀浆重量。匀浆按照1 g/ml的标准折算成体积, 加入15%(V/V)高氯酸50 μl, 旋涡2 min沉淀蛋白, 12000 r/min离心10 min, 取上清液20 μl样品进行HPLC分析。浓度超过线性范围的样品经准确稀释后适当倍数后进样。
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    色谱条件:色谱柱:Dikma Diamonsil C10(5 μm, 200 mm×4.6 mm);流动相:甲醇-0.05 mol/L醋酸铵缓冲液, 使用前需将pH值调节至6.0;流速:1.2 ml/min;紫外检测波长暂定300 nm;柱温:42℃;待见样品进样量:20 μl[2]。

    1. 3 统计学方法 采用SPSS12.0统计学软件对数据进行处理。计量资料用均数±标准差( x-±s)表示, 采用t检验;计数资料用率(%)表示, 采用χ2检验。P<0.05表示差异有统计学意义。

    2 结果

    对照组Mean大鼠给药后15、30、45、60、75 min后肺组织药物浓度依次为:(5.806±2.315)、(3.775±2.243)、(2.551±1 .512)、(1.887±1.638)、(0.801±0.459)μg/ml;观察组Mean大鼠给药15、30、45、60、75 min后肺组织药物浓度依次为:(9.173±2.398)、(4.596±2.327)、(2.682±1.655)、(1.596± 1.780)、(0.720±0.472)μg/ml。对照组SD大鼠给药15、30、45、60、75 min后肺组织药物浓度依次为:(2.118±1.692)、(0.691±0.485)、(0.533±0.330)、(0.522±0.159)、(0.145±0.080)μg/ml;观察组SD大鼠给药15、30、45、60、75 min后肺组织药物浓度依次为:(2.004±1.531)、(1.487±0.568)、(0.444±0.299)、(0.327±0.128)、(0.037±0.020)μg/ml。
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    对照组Mean大鼠给药15、30、45、60、75 min后子宫药物浓度依次为:(14.586±8.153)、(8.332±6.268)、(8.332± 6.245)、(1.384±0.259)、(0.558±0.318)μg/ml;观察组Mean大鼠给药15、30、45、60、75 min后子宫药物浓度依次为:(10.427±6.458)、(5.140±4.125)、(1.369±0.857)、(0.206± 0.097)、1.003(±0.043)μg/ml。对照组SD大鼠给药15、30、45、60、75 min后子宫药物浓度依次为:(2.831±1.249)、(0.642±0. 530)、(0.535±0.427)、(0.277±0.089)、(0.134±0.018)μg/ml;观察组SD大鼠给药15、30、45、60、75 min后子宫药物浓度依次为:(1.253±0.981)、(2.664±1.462)、(0.361± 0.069)、(0.488±0.071)、(0.113±0.017)μg/ml。

    对照组Mean大鼠给药15、30、45、60、75 min后卵巢药物浓度依次为:(4.882±2.498)、(1.357±0.925)、(0.127± 0.098)、(0.501±0.092)、(0.868±0.561)μg/ml;观察组Mean大鼠给药15、30、45、60、75 min后卵巢药物浓度依次为:(4.379±2.981)、(3.952±1.658)、(2.088±1.925)、(1.241± 0.197)、(1.028±0.092)μg/ml。对照组SD大鼠给药15、30、45、60、75 min后卵巢药物浓度依次为:(0.598±0.095)、(0.452±0.027)、(0.130±0.029)、(0.168±0.928)、0.107 μg/ml;观察组SD大鼠给药15、30、45、60、75 min后卵巢药物浓度依次为:(0.596±0.249)、(0.379±0.126)、(0.033±0.002)、(0.866±0.219)、(0.876±0.327)μg/ml。
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    两组大鼠肺组织、子宫以及卵巢药物浓度有明显差异, 其中观察组肺组织、子宫以及卵巢药物浓度明显比对照组更高, 有效药物浓度维持时间明显更长, 两组对比差异有统计学意义(P<0.05)。

    3 讨论

    本次试验对甲氨蝶呤HPLC检测方法的应用价值进行探究, 最终发现, 该方法操作便捷, 灵敏度高, 检测获得数据精确可靠, 用于检测体内血浆与组织的MTX药物浓度, 能够获得预期效果。另外, 本组研究通过对大鼠股动脉插管髂内动脉与股静脉插管灌注MTX, 充分证实了该方法的可行性, 使动脉介入治疗的动物研究取得了新的进展。

    经髂内动脉灌注MTX大鼠实验最终发现, 子宫与卵巢均具有理想的药物浓集现象, 药物在这部分组织的有效浓度持续时间会相对较长, 同时, 相较于全身静脉化疗, 髂内动脉化疗在盆腔脏器的治疗中优势更加明显, 对肺部转移病灶的治疗也同样发挥着重要作用。该研究结论与朱鲲鹏等[3]人报道内容基本一致。
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    综上所述, 经本次研究最终发现, 通过髂内动脉灌注化疗药物, 能有效改善对子宫、卵巢组织的治疗效果。同时, 对肺部病灶也能发挥出显著的治疗效果, 相较于全身静脉给药优势更为明显, 临床务必给予高度重视。

    参考文献

    [1]刘健, 曹云祥, 朱艳.新风胶囊对佐剂性关节炎大鼠心功能及心肌超微结构影响.中国中西医结合杂志, 2012, 23(11):1543-1548.

    [2]段晶晶, 周婷, 徐峰.甲氨蝶呤在抑郁SD大鼠体内药代动力学. 今日药学, 2010, 31(11):23-25.

    [3]朱鲲鹏, 张岭, 张曼, 等.重组羧肽酶G2对甲氨蝶呤在Wistar大鼠体内代谢特征的影响.药物分析杂志, 2013, 15(5):763-769.

    [收稿日期:2015-01-09], http://www.100md.com(毛姗)