BCR/ABL DCDF-FISH信号特征与染色体核型的关系及其在慢性粒细胞白血病中的意义(1)
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【摘要】 目的 探讨慢性粒细胞白血病(CML)BCR/ABL DCCF-FISH的信号特点及其与染色体核型的关系。结果 使用BCR/ABL的DCDF探针对65例慢性粒细胞白血病骨髓标本进行荧光原位杂交及染色体核型检查。结果 65例CML核型43例Ph阳性,1例阴性,其余21例未行核性检查或无可分析分裂相;FISH结果65例均为BCR/ABL阳性,其中9例伴ASS基因缺失,5例复杂易位,1例+Ph伴ASS基因缺失。结论 传统核型与DCDF-FISH,应互相结合,方可对遗传学特征作出更准确分析。
【关键词】 慢性粒细胞白血病; Ph染色体;DCDF-FISH;BCR/ABL
Significance of BCR/ABL DCDF-FISH signal pattern and karyotype in chronic myeloid leukemia
DU Qing-hua,YING Yi,CHEN Xiao-yan.Department of Hematology, the First People’s Hospital of Guangzhou,Guangdong 510180,China
【Abstract】 Objective To investigate the relation between the BCR/ABL DCDF-FISH signal pattern and karyotype in chronic myeloid leukemia(CML).Methods 65 cases of CML were performed FISH and karyotyping.Results In 65 cases CML.43 cases were Ph positive,1 case was Ph negative,21 cases had no performed karyotyping analysis.All of 65 cases were FISH positive,9 cases with ASS gene deletion,5 cases with complex variant translocation,1 case with(+)Ph and ASS gene deletion.Conclusion More precise analysis can be got by combining the result of FISH and karyotyping.
【Key words】 CML; Ph CHROMOSOME; DCDF-FISH; BCR/ABL
费城染色体(Ph)是慢性粒细胞白血病(CML)的遗传学特征。通过染色体核型分析,能观察到该染色体源于与9号染色体易位后的22号染色体。荧光原位杂交(FISH)的出现则使人们能从分子水平上检测该易位导致的BCR/ABL融合基因[1-3]。这些检测手段都为CML的发病、诊断及治疗提供了重要的依据。本研究通过使用DCDF探针对65例CML进行FISH检测,并且结合染色体核型进行分析及对比,结果如下。
1 材料与方法
1.1 临床资料 65例病例为2006~2009年来我院就诊CML患者,其中男50例,女15例,平均年龄44岁。诊断参照《血液学诊断及疗效标准》[4]。
1.2 试剂及仪器 仪器: ZEISS AXIOPLAN2荧光显微镜;标本采集: 取患者骨髓标本2 ml,以肝素抗凝。以终密度1×106/ml接种于10 ml 1640(含20%胎牛血清)中。培养24 h后加秋水仙碱(终浓度0.05μg/ml)作用30 min,用0.075M KCl低渗处理半小时,再以3:1甲醇、冰醋酸固定三次。固定后标本放-20℃保存待检。
1.3 细胞遗传学分析 核型以G显带技术分析20个分裂相,核型根据《人类细胞遗传学国际命名体制2005》(ISCN 2005)进行描述。
1.4 荧光原位杂交 FISH探针使用BCR/ABL DCDF探针(Vysis)。取固定后的标本滴于玻片上,气干后标记杂交区域,并于55℃温箱老化30 min。取1 μl探针2 μl去离子水及7 μl杂交缓冲液共10 μl混匀,滴加于杂交区,加盖玻片以树胶封固,然后置于杂交仪中,运行的杂交程序为75℃2 min,37℃16 h。去除盖玻片,以含0.1%NP40的0.4×SSC洗涤、晾干,然后加10 μlDAPI于杂交区并以盖玻片封片,在荧光显微镜下观察。蓝色(DAPI)作为衬染,染的是细胞核;红色(Red)是9q上的ABL基因;绿色(Green)是22q上的BCR基因;2红2绿互相分离为阴性,若红色信号与绿色信号相连甚至重叠则认为是融合信号。计数200个细胞,并记录其信号特征。
2 结果
2.1 核型及FISH的检出率 65例CML患者 FISH均为阳性,核型43例阳性,1例阴性,其余21例未行核性检查或无可分析分裂相,FISH检出率为100%,核型检出率为97%。
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