杨丽丽

    现有研究已经证实细胞凋亡过程与凋亡基因表达关系密切[1-3], 测定细胞凋亡基因表达具有重要意义。XIAP作为新型细胞凋亡抑制蛋白(IAP)家族的成员, 能够与Caspase-3、Caspase-9等直接发生相互作用, 对细胞凋亡具有显著抑制效果。本研究通过分析总结胃癌组织XIAP和基因的表达特点, 为胃癌诊治提供新思路, 现总结如下。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 选取2014年6月～2016年8月因胃癌而于本院接受手术治疗的76例患者, 将术中获取的76份胃癌组织作为胃癌组, 50份癌旁正常组织作为正常组。入选标准：①病理检查证实为胃部恶性肿瘤；②患者知情同意；③肿瘤组织保存完整；④排除拒绝参加实验者；⑤排除有其他不适宜因素者。其中男48例, 女28例；年龄35～76岁, 平均年龄(61.35±6.07)岁；组织学分化等级为低分化35例, 中分化21例, 高分化20例。选取同期资料相仿、病例检查确诊为胃部良性病变的60例患者, 活检获取的60份胃良性病变组织作为胃良性病变组, 其中男41例, 女19, 年龄34～78岁,平均年龄(58.62±6.46)岁。

    1.2 试剂和仪器 兔抗人XIAP单克隆抗体(一抗)、SP检测试剂盒、DAB显色试剂、显微镜电泳仪、其他免疫组化检测相关试剂、RT-PCR检测相关试剂、PCR分析软件等。

    1.3 方法

    1.3.1 XIAP测定方法 组织脱蜡水化后用过氧化物酶阻滞剂在避光条件孵育15 min, 取出蒸馏水冲洗后用磷酸缓冲盐(PBS)溶液浸泡并湿盒；加入一抗1000 ml于组织上, 再次孵育30 min, 取出后再用PBS溶液浸泡并湿盒, 添加100 ml体积Chem MateTMEnvusion/HRP溶液在组织上后再孵育30 min, 取出后再用PBS溶液浸泡并湿盒, 向组织表面滴加DAB显色剂100 ml, 完全显色之后, 用蒸馏水将显色剂冲洗干净以终止显色反应, 对显色成功的标本进行梯度酒精脱水(从70%酒精开始至100%酒精结束), 将标本放置到二甲苯溶液中浸泡3次后, 取出再次脱水并用中树胶封片后行镜下染色结果观察 ......