王东 郜振武 杨秋荟 孙留群 杨学斌 陈晨

    血脊髓屏障中的粘附连接蛋白与紧密连接蛋白能够防止外周循环物质进入骨髓。脊髓受损后,血脊髓屏障随之受损,使血细胞进入脊髓,产生炎症反应,导致脊髓受损和神经功能永久性损伤[1]。基质金属蛋白酶在血脊髓屏障受损中起主导作用,而屏障损伤是造成继发性损伤的影响因素[2]。说明维持脊髓屏障的完整及正常功能可能有助于减轻脊髓损伤和恢复神经系统。间充质干细胞移植治疗脊髓损伤疗效确切,而外泌体是间充质干细胞旁分泌机制的重要成分[3]。临床上将骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)来源外泌体用于治疗心血管等疾病,但目前在脊髓损伤方面的研究较少。基于此,本研究将构建大鼠脊髓损伤模型,移植干细胞来源外泌体,探讨其通过MMP-9 表达减轻脊髓损伤的机制。现报告如下。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    1.1.1 细胞来源 BMSCs(厂家：广州赛业生物科技有限公司)选自大鼠股骨骨髓。

    1.1.2 实验大鼠 选取60 只SD 大鼠(厂家：珠海百试通生物科技有限公司),体质量约200 g,本研究于2021 年1 月～2022 年1 月在白求恩医院基础医学实验室完成,本研究经白求恩医院伦理委员会批准。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养 BMSCs 复苏后,用10%胚胎牛血清(厂家：Ausbian；货号：WS500T；规格：500 ml/瓶)和1%青霉素(厂家：普利莱；货号：APC8250-5；规格：5 g)和链霉素DMEM/F12 完全培养基培养,1 d 后换成新鲜完全培养基,待细胞融合率达80%时通过0.25%胰酶消化,并以1∶4 的比例传代。

    1.2.2 提取外分泌体 从细胞培养上清液中提取外泌体,首先使用超滤离心管将胎牛血清离心55 min(3000×g),获取去外泌体胎牛血清 ......