γ干扰素体外诱导大鼠脾脏树突状细胞IDO表达的实验研究(2)

http://www.100md.com 2009年4月25日 张　晶　徐　钧

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     1.2.4不同浓度IFN-γ对DC的作用细胞培养第9天分成四组，分别以0、100、300、500U/mL的浓度加入IFN-γ，继续培养18h后，收集半贴壁细胞用于IDO mRNA的检测。

    1.2.5荧光定量PCR测定IDO mRNATrizol试剂提取不同浓度IFN-γ作用后的DC总RNA，根据Fermentas RT-PCR试剂盒说明书反转录合成cDNA第一链。大鼠IDO扩增片段上游引物为5’-TGAAGATGTGGGCTTTGCTCTA-3’，下游引物为5’-GGCAGATTTCTAGCCACAAGGA-3’，TaqMan探针序列为(FAM)ACATCCACTGGAGGAGCTGCCTGATACG。采用β-actin作为内参，反应体系为25μl，在StepOne TM实时荧光定量PCR仪上进行相对定量PCR反应。扩增条件为94℃ 2min；94℃ 20s，60℃ 40s，循环次数为40次。

    1.3统计学处理

    采用单因素方差分析(ANOVA)方法，各组测得值以均数±标准差(χ±s)表示，P<0.05为有显著性差异。

    2结果

    2.1DC的形态学观察

    新分离的DC呈圆形，胞体小；培养第3天胞体圆，无突起；培养第7天出现毛刺状细胞，毛刺短，细胞呈集落生长(图1)；培养第10天加LPS刺激后，树突状突起明显，出现典型的DC形态(图2)。

    2.2细胞表型分析

    流式细胞仪分析结果显示，80%以上培养10d的DC表达大鼠DC特异性表达分子OX-62(图3)；DC表面共刺激分子CD80和CD86的表达分别为75%和90%以上(图4) ......

    http://www.100md.com/html/paper/1673-9701/2009/12/23-1.htm

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