通心络对脑梗死合并糖尿病患者血小板活化标记物表达的影响
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[摘要] 目的 探讨急性脑梗死合并糖尿病患者血小板活化状态及通心络治疗对血小板活化状态的影响。方法 采用流式细胞检测方法,对急性脑梗死合并糖尿病患者血小板活化标记物P选择素(CD62p)及PAC-1进行检测研究。结果 急性脑梗死合并糖尿病患者血小板活化标记物表达高于单纯脑梗死组,明显高于正常对照组,通心络及阿司匹林能明显抑制血小板活化标记物表达,两组比较差异无统计学意义。结论 急性脑梗死发生过程中,血小板活化起着重要作用,且高血糖促进体内血小板活化,加重脑血管病的发生;通心络及阿司匹林在治疗急性脑梗死及脑梗死合并2型糖尿病中能明显抑制血小板活化,在一定程度上阻断了血小板活化过程,具有治疗作用。
[关键词] 通心络; 脑梗死; 糖尿病; CD62P; PAC-1
[中图分类号] R743 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701(2009)33-53-02
血小板活化在急性缺血性脑血管病的发生过程中起着重要作用。研究表明,血小板膜表面蛋白标记物P选择素(CD62p)及PAC-1为检测血小板活化程度和功能状态的灵敏指标,流式细胞技术的应用为评价血小板在体内的活化程度提供了可靠方法[1]。
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本研究我们通过流式细胞技术,对急性脑梗死患者采用不同抗血小板治疗,分析对照阿司匹林及通心络两种抗血小板药物对血小板活化标记物表达的影响,为急性缺血性脑血管病的预防、治疗提供可靠理论依据。
1 对象和方法
1.1 一般资料
脑梗死患者32例,男20例,女12例;年龄43～76岁,平均(60±8.2)岁。脑梗死合并2型糖尿病患者86例,男50例,女36例;年龄45～75岁,平均(58.3±7.8)岁。全部病例选自2006年6月～2007年12月神经科住院治疗患者,诊断符合第四届脑血管病制定的诊断标准,2型糖尿病诊断符合WHO在1985年制定的糖尿病诊断标准,血糖控制理想,同时经头颅MRI检查证实,排除大面积脑梗死患者,病程在起病6h～3d以内,排除肿瘤、血液系统疾病及免疫性疾病,患者入院后按随机分组的原则分成三组,第一组(n=42)给予通心络口服,每次4粒,每天3次;第二组(n=40)给予拜阿司匹林治疗,首次200mg,次日始每次100mg,1次/日,顿服;第三组(n=36)不用抗血小板药物治疗,所有患者在入院第1日开始治疗,基础治疗相同,全部给予疏血通注射液静脉滴注,6mL每日一次连用2周,2周后复查血小板活化标记物的表达。阴性对照组30例,男18例,女12例;年龄28～60岁,平均(48.3±7.9)岁;为同期医院体检中心健康者,排除高血压、糖尿病、冠心病、血液系统疾病。
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1.2 试剂与仪器
FITC、PE标记的血小板对照IgGl、IgM,PE标记的抗血小板α颗粒膜蛋白-140(CD62P)McAb,FITC标记的PAC-1,PerCP标记CD61,均为美国BD公司产品。流式细胞仪为BECTONDICKISON公司的FACS Galibur,用Cell Quset软件。
1.3 方法
取两只试管,一只加入5μL全血,再加入血小板阴性对照IgG-FITC、IgM-PE和CD61-PerCP McAb各10μL;另一只试管加入5μL全血及PAC-FITC、CD62P-PE和CD61-PerCP McAb各10μL。PerCP McAb各10μL,混匀后室温避光孵育30min,加入0.5mL PBS缓冲液,立即上机检测。
样品测试前,用标准荧光微球调整荧光检测CV值在2%以下,并设定血小板光散射的最佳阈值,消除其他细胞和噪声干扰。荧光检测经对数放大,收集30000个血小板。测试完毕数据存盘后用Cell quest分析软件分析结果。
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1.4 统计学处理
采用统计软件SAS8.0进行统计分析,三组间两两比较采用q检验(Newman-Keuls法),组内治疗前后比较用配对t检验,以P<0.05为有统计学差异的标准。
2 结果
通心络对脑梗死合并糖尿病患者血小板活化标记物表达的影响,流式细胞仪检测结果见图1-a～d。
流式细胞仪检测血小板活化指标结果:图1-a为检测时使用的阴性对照;图1-b为正常对照组检测结果,血小板活化水平较低;图1-c为脑梗死合并2型糖尿病患者血小板活化水平明显增高;图1-d经过通心络治疗,脑梗死合并2型糖尿病患者血小板活化水平较治疗前下降。
急性期脑梗死组、脑梗死合并糖尿病组及对照组血小板活化指标见表1,三组间两两比较采用q检验,急性脑梗死及脑梗死合并2型糖尿病组血小板活化标记物PAC-1、CD62p均显著高于健康对照组,脑梗死合并2型糖尿病血小板活化标记物PAC-1、CD62p高于脑梗死组,但是无统计学意义。
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对脑梗死合并2型糖尿病患者,通心络及拜阿司匹林治疗治疗2周后,组内治疗前后比较采用t检验,血小板活化标记物PAC-1、CD62p显著下降,但是三组间比较q检验差异无统计学意义,见表2。
3 讨论
血小板的质与量的变化在脑梗死发病中起重要作用。正常人的血小板基本处于静息状态,而在生理和病理性的血栓前状态、血栓性疾病过程中,血小板发生活化、激活,血小板可释放出多种活性物质以及表达多种分子标志物,促进血管内血栓的形成。脑梗死时由于组织损伤,内皮下胶原组织暴露,血小板向内皮下黏附,诱使血小板活化,使血小板表面CD62p表达明显增加。CD62p、凝血酶敏感蛋白和血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa一起加速血小板与内皮下基质的黏附及与纤维蛋白原等结合,血小板活化时表达的CD62p选择糖蛋白配体结合,促进白细胞与血小板的黏附及在血栓部位聚集,在启动及扩大的血栓形成中具有重要意义[1,2]。
陈保国[3]等研究表明均衡其他危险因素后,PAC-1、CD62p与脑梗死程度具有独立相关性,对活化血小板功能的检测可作为预测脑梗死发生的指标。当血小板黏附于血管破损处或受到活化作用后即被活化,暴露出纤维蛋白原受体(PAC-1),启动并促进血栓形成;而位于血小板α颗粒和内皮细胞棒状小体内的CD62p在静止期不表达或很少表达。CD62p不仅对血小板的黏附起促进作用,而且对血小板聚集有重要作用,在脑梗死的发生中具有重要作用。
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通心络胶囊是由人参、水蛙、全蝎、娱蛤、土鳖虫、蝉蜕、赤芍、冰片等制成的复方制剂,具有益气活血、通络止痛功效[4],药效学研究显示:通心络胶囊能减轻局灶性脑缺血所致的脑组织损伤,减小脑梗死范围,改善神经损伤症状,增加脑血流量,降低全血粘度,明显抑制血小板聚集和血栓形成,延长凝血时间。
糖尿病是心脑血管病的重要危险因素,高血糖可损伤内皮细胞,促使血小板活化。血小板活化为脑梗死的早期因素,应早期检测血小板活化标记物CD62p、PAC-1的水平;应用抗血小板药物预防,可以有效治疗糖尿病患者血小板的活化,对防止糖尿病患者脑血管病发生具有重要意义。
本研究表明脑梗死患者血小板明显活化,脑梗死合并2型糖尿病患者活化更加显著,血小板活化是脑梗死的重要发病机制。通心络具有抗血小板聚集、活化及降低血粘度作用;本研究显示通心络在脑梗死合并2型糖尿病患者,能够有效降低血小板的活化。在脑梗死的治疗中如果患者存在阿司匹林抵抗或者禁忌,可以使用通心络控制血小板活化,在脑梗死的治疗中具有应用价值。
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[参考文献]
[1] Atkinson C,Zhu H,Qiao F,et al. Complement-dependent P-selectin expression and injury following ischemic stroke[J]. J Immunol,2006,177(10):7266.
[2] Ishikawa M,Cooper D,Arumugam TV,et al. Platelet-leukocyte-endothelial cell interactions after middle cerebral artery occlusion and reperfusion[J]. J Cereb Blood Flow Metab,2004,24(8):907.
[3] 陈保国. 颈动脉粥样硬化性脑梗死引起血小板活化机制[J]. 老年医学杂志,2005,6(24):448-449.
[4] 吴以岭. 络病学[M]. 北京:中国科学技术出版社,2004:277-278.
(收稿日期:2009-06-15), 百拇医药(黄金忠 陈应柱 刘 刚 徐 耀)