阿托伐他汀联合吡格列酮对大鼠缺血再灌注心肌的保护作用(2)
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1.2试剂与仪器
吡格列酮由江苏恒瑞医药有限公司生产，阿托伐他汀(立普妥)购自大连辉瑞制药有限公司；超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)购自南京建成生物工程研究所；Evansblue从Sigma公司购进；TTC由Amersco公司提供。
1.3方法
1.3.1 大鼠心肌I/R模型的建立[4] ①麻醉大鼠，向腹腔内注射20%乌拉坦(5mL/kg)。②行气管切开并插管，与人工呼吸机相连接，频率设为55次/min，潮气量设为30mL。③接心电监护仪监测心电变化并作记录。④打开胸腔后找到冠脉左前降支(LAD)，并于起始处0.2cm左右处用穿线，待生命体征平稳后结扎LAD，30min后松开结扎线，再灌注60min，假手术组只穿线不结扎。结扎成功依据[5]：结扎处远端出现紫绀，ECG示：ST段抬高、R波高耸。再灌注成功依据：松开结扎线，远端出现紫绀的心肌颜色恢复，ST段抬高部分回落50%以上。
1.3.2 血清MDA、SOD测定 各组大鼠再灌注60min后取大鼠腹主动脉血，1500r/min ，离心10min后取血清，置于-70℃保存，以备用。所有标本收齐后严格按照试剂操作说明测定MDA、SOD，检测过程均符合实验室的质控要求。
1.3.3 心肌梗死面积测定[5] 各组大鼠经腹主动脉取血后，重新结扎冠状动脉左前降支(假手术组除外)，将2%的Evans blue注入腹主动脉，大鼠心肌将出现蓝染区(非缺血区)和非蓝染区(缺血区)，处死大鼠，将心脏取下。保留左心室，其余部分剪去，将其表面水分吸干，放置-20℃冰箱中，时间为30min，然后将其切成薄片，厚约2mm。将薄片放入TTC液中(pH值7.4)，并在37℃的水浴中浸泡30min，以区分灰白色区(梗死区)和淡红色区(缺血未梗死区)，之后用10%的甲醛固定24h，留取照片。至此心肌组织被分区为梗死心肌区(灰白色区)正常心肌区(蓝色区)及缺血未梗死心肌区(淡红色区)三部分。利用分析软件计算：①梗死区的心肌组织(IR)占左心室(LV)总面积百分比(IR/LV)。②梗死区的心肌组织(IR)占危险区的心肌组织(AAR)百分比(IR/AAR)。③危险区的心肌组织(AAR)占左心室(LV)总面积的百分比(AAR/LV)，以IR/AAR、IR/LV表示梗死心肌组织。
1.4统计学处理
实验所得数据均用SPSS17.0软件包处理，数据用均数±标准差(χ±s)表示；采用方差分析进行多组资料的比较，多组资料两两比较用LSD检验。以P<0.05为差异有显著性。
2 结果
2.1各组大鼠血清MDA、SOD的检测结果
“缺血/再灌注组”与假手术组相比，血清MDA升高，SOD降低(P<0.01)。阿托伐他汀组、吡格列酮组与”缺血/再灌注组”相比，MDA降低，SOD升高(P<0.01)，阿托伐他汀组与吡格列酮组之间无统计学差异(P>0.05)。联合用药组较阿托伐他汀组、吡格列酮组及缺血再灌注组，MDA降低，SOD升高(P<0.01)。见表1。
2.2 对各组大鼠心肌梗死面积的影响
缺血时间为30min，再灌注时间为60min，经上述处理后，各组危险区的心肌组织(AAR)占左心室(LV)总面积的百分比(AAR/LV)均无统计学差异(P>0.05)。阿托伐他汀组、吡格列酮组及联合用药组的梗死面积，较缺血再灌注组均明显减少(P<0.01)。联合用药组与阿托伐他汀组、吡格列酮组相比，梗死面积减少(P<0.01)。阿托伐他汀组与吡格列酮组之间无统计学差异(P>0.05)。见表2。
3 讨论
研究证实，氧自由基(OFR)经脂质过氧化反应后产生的血清丙二醛(MDA)，具有很强的交联性，可以使酶等带有氨基的化合物发生交联，丧失其活性[7]，所以体内MDA的水平是用于反映体内细胞的损伤程度的指标之一；SOD是生物体内重要的抗氧化酶，是机体内天然存在的OFR清除因子，通过清除OFR，而在体内起到调节氧化与抗氧化平衡的重要作用。
已有研究表明，OFR与I/R损伤有密切关系，I/R时导致OFR堆积，是由于OFR产生增加，而SOD活性降低，从而使膜脂质过氧化产物MDA增多，进一步破坏了心肌细胞膜的结构和功能，加速心肌细胞损害程度[8]。本实验对I/R大鼠的血清中的SOD活性和MDA含量进行测定，将测定结果作为反映OFR清除系统的活性和脂质过氧化程度，来判断心肌细胞的损害程度，结果显示，大鼠心肌I/R时，SOD活性明显降低，MDA水平明显增高，这可能是由于大鼠心肌发生I/R损伤时，OFR的产生超出了心肌细胞本身的清除能力，从而使血清中MDA含量明显增加，表明OFR是导致I/R损伤发生的重要因素之一。
本试验结果也显示，两单独用药组均能减少大鼠缺血再灌注心肌的梗死面积，并降低血清MDA和升高血清SOD；两个单独用药组相比，对心肌的保护作用差异无显著性，联合用药组对I/R心肌保护作用更加显著，说明阿托伐他汀、吡格列酮两药单独应用能够减轻大鼠心肌I/R损伤，并且还能使SOD活性明显增高，MDA水平明显降低，而阿托伐他汀与吡格列酮两药合用可能使上述作用具有协同功效。
在当代社会，糖尿病已经成为冠心病的重要独立危险因素之一。本实验探讨阿托伐他汀、吡格列酮及联合应用对I/R心肌的保护作用及可能机制，对冠心病合并糖尿病患者的临床意义更加显著，旨在为其临床应用提供可靠的实验依据。
[参考文献]
[1] Ostadal P，Alan D，Hajek P，et al. Fluvastatin in the therapy of acute coronary syndrome：rationale and design of a multicenter，randomized， double-blind，placebo-controlled trial[J]. Curer Control Trials Cardiovascular Med，2005，6(1)：4.
[2] Napolip DI，Taccard AA，Grilli A，et al. Chronic treatment with Rosuvastatin modulates nitricside synthase expression and reduces ischemia-ripper-fusion injury in rat heart[J] ......
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