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编号:12176682
一氧化氮合酶基因多态性与吉林省汉族人群冠心病的关系研究(1)
http://www.100md.com 2012年1月25日 于薇
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     [摘要] 目的 研究内皮型一氧化氮合酶基因多态性与冠心病的关系。 方法 收集120例患有冠心病的患者和102例年龄、性别相匹配的健康对照者, 采用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性分析其多态性并确定基因型。 结果 冠心病组eNOS基因的(TT+TG)基因型明显的高于正常对照组(OR = 2.02,95%CI:1.09-3.75,P < 0.05),两组等位基因T差异具有统计学意义(OR = 1.96,95%CI:1.14~3.36,P < 0.05)。 结论 eNOS基因G894T基因多态性与冠心病发病有关。

    [关键词] 冠心病;动脉粥样硬化; 基因多态性;eNOS

    [中图分类号] R541.402 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701(2012)03-0087-02

    Association study between the polymorphisms of nitric oxide synthase gene and coronary heart desease in Jilin Province

    YU Wei

    The People's Hospital of Changchun City in Jilin Province, Jilin 130051,China

    [Abstract] Objective To investigate the risk of coronary heart desease with endothelial constitutive nitric oxide synthase gene polymorphisms. Methods We investigated the G894T mutations in the eNOS gene in 120 Chinese patients with coronary heart desease and 102 age- and sex-matched healthy controls. Its genotype was defined by the polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism analysis. Results The (TT+TG) genotype of eNOS in the coronary heart desease group were higher than control group(OR = 2.02, 95%CI: 1.09-3.75, P < 0.05).The allele gene T had statistical meaning in two group(OR=1.96, 95% CI: 1.14-3.36, P < 0.05). Conclusion There is a synergistic effect of eNOS gene polymorphisms in patients with coronary heart desease.

    [Key words] Coronary heart desease; Atherosclerosis; Polymorphism; eNOS

    冠状动脉粥样硬化性心脏病(CAD)已成为许多中老年人死亡的一个最常见原因,并且与遗传因素密切相关。故应用分子生物学方法来研究基因致病已逐步成为热点。NO具有抗平滑肌细胞增殖、抑制血小板聚集和白细胞粘附、扩张血管、调节血压的作用[1]。决定NO合成的关键酶是一氧化氮合酶(NOS),内皮源性一氧化氮合酶(eNOS)的基因多态性已被证实,并且与NO生成量的降低有关[2]。我们研究吉林汉族人群冠心病的eNOS基因多态性,用以探讨eNOS基因多态性与冠心病的关系。

    1 对象与方法

    1.1 对象

    收集2009年1月~2010年6月于我院心内科确诊的冠心病患者120例,年龄(62.93±10.14)岁;同时选择年龄和性别相匹配的健康体检者102作对照,年龄(63.69±11.13)岁。病例组均符合1979年WHO制定的关于缺血性心脏病的诊断标准。对照者均无心脑血管病史。

    1.2 方法

    1.2.1 引物的合成与设计 采用Lv等[3]针对eNOS基因G894T多态性设计的一对引物,由上海生工生物工程公司合成。上游引物:5’-AAG GCA GGA GAC AGT GGA TGG A-3’;下游引物:5’-CCC AGT CAA TCC TTT GGT GCT CA-3’。

    1.2.2 基因组DNA提取 抽取冠心病患者及正常对照者空腹状态下的全血5mL加EDTA抗凝,采用盐析法来提取基因组DNA,保存于-20℃冰箱。

    1.2.3 PCR反应条件及扩增体系 ①PCR反应条件: 94℃预变性4 min,94℃变性1 min,52℃退火1 min,72℃延伸1 min,共35个循环,最后72℃延伸4 min. ②PCR扩增体系:10X PCR缓冲液2 μL,5 μmol/L上下游引物混合液3 μL ,TaqDNA聚合酶0.25 μ/uL,2 mol/L dNTP 2 uL,待测模板DNA l μL,补水至20 μL。

    1.2.4 扩增产物的酶切 总反应体系为20 μL,其中10X缓冲液2 μL,PCR产物l0 μL, 内切酶BanII 6 u,其余用无菌水补充,在37℃条件下水浴16 h 。酶切产物用EB染色,3%琼脂糖凝胶电泳,紫外成像系统下观察结果 ......

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