丹参对哮喘患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞影响机制的研究(2)
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参见附件。
1.3 治疗方法
治疗前各组均测血常规、肝肾功能、血糖、心电图及肺功能等，治疗1周后复查上述指标。两组患者均给予包括吸氧、β受体激动剂、激素、抗生素等常规治疗。观察组在常规治疗的基础上予以丹参注射液20 mL，加入5%葡萄糖注射液中静滴，1次/d，1疗程14 d。
1.4 检测指标
①CD4+CD25+调节性T细胞的测定：采集哮喘患者外周静脉血2 mL，肝素抗凝；取肝素抗凝的全血100 μL，加入CD4-FITC和CD25-PE单克隆抗体20 μL，IgG1-FITC和IgG1-PE作为同型对照，室温避光反应30 min，加2 mL optiLyseC溶血素室温下溶解红细胞20 min[4]；PBS洗涤10 min，弃上清液后加2 mL PBS后用流式细胞仪检测。FACS Calibur型流式细胞仪由美国 Becton Dickinson 公司提供。所有试剂均由苏州生物基因有限公司提供。②肺功能检测：应用JEAGER肺功能仪，分别于同一时间段(每日上午的9：00～11：00)测定用力肺活量(FVC)、第一秒用力呼气容积(FEV1)、FEV1占预计值的百分数(FEV1%)。
1.5 疗效评判标准[3]
明显好转：呼吸困难、气喘、胸闷、咳黄痰、发烧完全消失；好转：呼吸困难、气喘、胸闷明显减轻，咳黄痰、发烧完全消失；无效：呼吸困难、气喘无改善，发烧减退、 咳黄痰减少。
1.6 统计学方法
应用SPSS 12.0统计学软件处理数据，计量资料采用(x±s)表示，治疗前后采用配对t检验，计数资料比较应用χ2检验，P < 0.05为差异具有统计学意义。
2 结果
经过治疗后，观察组的疗效明显优于对照组，两组肺功能治疗后均较治疗前明显改善，且观察组较对照组改善更明显，治疗后两组的CD4+CD25+Treg均较治疗前明显升高，且观察组较对照组升高更明显，两组上述指标分别比较，差异有统计学意义(P < 0.05)。见表2～4。
2.1 两组治疗后的疗效比较
如表2所示。
2.2 研究组与对照组患者治疗前后肺功能比较
如表3所示。
2.3 两组治疗前后CD4+CD25+Treg的变化比较
3 讨论
在哮喘的发病机制中T细胞的活化及其细胞因子的分泌是调节气道炎症反应的中心环节，是造成哮喘难以控制的主要原因。目前认为 CD4+CD25+Treg在气道免疫耐受的形成中发挥重要的调节功能，其在哮喘发病机制中的作用成为人们关注的方面之一。胸腺源性CD4+CD25+Treg源于胸腺的功能成熟的细胞群，Tregs在支气管哮喘发病中的作用证据：最初在动物试验中发现了 Tregs 抑制过敏反应的作用[5]。Lewkowi CH等[6]通过用抗CD25单抗去除小鼠体内的 CD4+CD25+调节性T细胞研究发现，CD4+CD25+调节性 T细胞对实验性哮喘有保护作用，其机制可能是通过部分抑制树突状细胞的激活来实现的。现在的许多研究也认为，控制哮喘不能仅仅纠正 Th1/Th2平衡，而是应该抑制炎症发生的机制，像CD4+CD25+Treg参与的免疫调节过程。因此，这提示我们可以通过改变 CD4+CD25+调节性T细胞的功能，使其成为新的治疗靶目标之一，为哮喘的治疗提供广阔的前景[7-9]。
大量研究和临床观察均表明，使用丹参注射液可以明显改善哮喘患者的呼吸功能，对哮喘患者副作用小，可以长期使用。丹参具有扩张血管、降低血压、 降低血脂、增加血流量增强心肌收缩力、减慢心率等作用[10]。本组研究中，我们在常规治疗的基础上应用丹参注射液，结果显示，治疗后，观察组的总有效率为93.33%，其疗效明显优于对照组，说明在常规治疗基础上加用丹参注射液治疗支气管哮喘可明显提高疗效，且可防治和减轻糖皮质激素的不良反应， 适于临床常规治疗，与李峰等[10]报道基本一致，且本研究两组肺功能治疗后均较治疗前明显改善，且观察组较对照组改善更明显。
另一方面，我们的研究结果显示，治疗后两组的CD4+CD25+Tre均较治疗前明显升高，且观察组较对照组升高更明显，差异有统计学意义(P < 0.05)，说明在常规治疗的基础上联合丹参可有效治疗哮喘，其机制可能与促进 CD4+CD25+Treg的产生有关，这个研究结果与薛克营[11]等研究报道基本一致。现代医学研究发现：丹参为自由基的强力清除剂，复方丹参注射液尚可使哮喘的T 淋巴细胞百分率上升，还能增加毛细血管开放， 加快血液流速，改善微循环[12]。
综上，应用丹参治疗支气管哮喘疗效确切，可能明显改善患者的肺功能，且分析其疗效考虑可能是由于通过调节CD4+CD25+Tre而发挥免疫作用机制而实现的，但具体机制仍需扩大样本数，进行进一步深入的研究。
[参考文献]
[1] Chen X，Murakami T，Oppenheim JJ，et al. Differentiares Donse of murine CD4+CD25+ and CD4+CD25-T cel1s examethas0ne-induced cell death[J]. Eur J Immunol，2004，34859-34869.
[2] Kearley J，Barker JE，Robinson Ds，et a1. Reso1ution of airway inflammation and hyperreactivity after in vivo transfer of CD4+CD25+ regulatory T cells is interleukin 10 dependent[J]. J Exp Med，2005，20Z：1539-1547.
[3] 中华医学会呼吸病学分会哮喘学组. 支气管哮喘防治指南[J]. 中华结核和呼吸杂志，2003，26(3)：132-138.
[4] 马祥，毛辉，梁宗安. CD4+CD25+调节性T细胞及其分子标记物与支气管哮喘[J]. 中华哮喘杂志(电子版) ......
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