1.4 流式细胞术

    取对数生长期细胞，常规胰酶消化制成单细胞悬液，调整细胞浓度，使细胞浓度为10 000个/孔，均匀接种于6孔平底培养板，培养24 h后，加入处理因素，设空白对照组，DADS处理组(包括40 mg/L，50 mg/L，60 mg/L三个浓度)，每组设6个复孔，继续培养12及24 h。收集细胞，离心，1 000 rpm×5 min，弃上清，用4℃预冷的PBS溶液重悬细胞，离心，1000 rpm×5 min，重复1次，用4℃的70%乙醇固定4 h，检测前用PBS洗3次，RNA酶消化，碘化丙啶(PI)染色，流式细胞仪分析DNA含量，检测群体细胞中处于各个细胞周期中的细胞比例。

    1.5 免疫细胞化学分析

    取对数生长期细胞，常规胰酶消化成单细胞悬液，调整细胞浓度为1.5×106/mL，按上述分组制备细胞爬片，用4%多聚甲醛在4℃下固定20 min，PBS漂洗3次，每次2 min；滴加一滴内源性过氧化物酶封闭液(试剂1)，室温下孵育10 min，用蒸馏水洗3次，每次2 min；滴加封闭用正常羊血清(试剂2)，室温孵育10 min，甩干封闭液，滴加一抗，37℃过夜；PBS洗3次，每次2 min；滴加生物素标记羊抗兔二抗(试剂3)，37℃孵育40 min；PBS洗3次，每次2 min；滴加HRP标记的链霉亲和素(试剂4) ......