支原体鉴定及药敏试验一体化试剂盒由珠海黑马生物工程有限公司生产，取无菌拭子洗脱液，按试剂盒说明书操作，与生长对照孔比较，培养24 h后Uu孔由黄色变为橙色或红色且未见浑浊为阳性，表示有Uu生长，不变色表示阴性。筛选获得77株解脲脲原体菌株，-70℃保存。

    1.3 药敏试验结果判断

    支原体鉴定药物环丙沙星、氧氟沙星和司帕沙星3种药物高、低两个浓度各设1孔，均不变色表示敏感，都变红色表示高度耐药，低浓度孔变红色、高浓度孔不变色表示低度耐药。

    1.4 DNA模板的制备

    取上述细菌株培养物500 μL，6 000 r/min离心10 min，沉淀中加入25 μL细菌裂解液，充分混匀后沸水浴10 min，10 000 r/min离心10 min，取2 μL上清作为PCR的DNA模板。

    1.5 引物设计

    参考GenBank登录血清3型解脲脲原体gyrA和parC基因参考序列(GenBank：AF222894.1)及QRDR位置设计上、下游引物。gyrA基因上游引物序列：5’-GCT GCT TTC GAA AAC GGA ATG-3’，下游引物序列：5''-TGA TGG TAA AAC ACT TGG AAC-3’。parC基因上游引物序列：5’-GAC GAA TTT TAT ACG CAA TG-3’ ......