三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响(2)
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14%硝酸脱钙液是常用于临床脱钙液之一，具有脱钙能力最强、脱钙时间最短等优点。但是，对骨组织脱钙程度较难把握，容易造成过度脱钙现象；同时脱钙后易出现组织肿胀及细胞结构不完整清晰的不良现象。硝酸在脱钙过程产生CO2，气泡从组织中溢出将导致结缔组织分离。另一方面，硝酸对组织进行脱钙时还酸化组织，造成细胞核着色能力下降而返蓝困难进而变成淡红色，对比度差，由于亚硝酸形成使组织变黄而影响其后的染色[3]，在室温条件下更明显。硝酸在溶解骨组织钙盐时也对抗原物质具有破坏性，因而抗原免疫活性降低，免疫组化染色效果不佳[4]。结合本实验验证硝酸脱钙液脱钙后较易影响其后的免疫组化染色效果。
EDTA是科研中常用的脱钙剂，能够与羟基磷灰石结晶的外层钙结合，同时促进内层结合钙向外转移，进而溶解钙盐，是脱钙和免疫组化染色理想的脱钙剂[5]。本实验观察到EDTA脱钙液对骨组织脱钙效果较好，能保持完整的组织结构，且不破坏抗原物质，免疫组化染色阳性细胞数量多、着色深、背景淡。然而，在室温条件下，其脱钙时间过长，脱钙后组织稍微变硬，不太适合临床电镜快速诊断的要求，且其价格较贵，综合而言不利于临床检查工作。目前认为，应用微波技术可促进EDTA的螯合作用，缩短脱钙时间[6]。使用微波技术时应注意固定实验条件、调整微波功率和时间、温度也不能超过60℃等。
本研究表明，与硝酸、EDTA脱钙液比较，PLANK脱钙液具有常温脱钙时间较短、脱钙效果较好，免疫组化染色着色鲜艳、对比度佳、阳性细胞数多等优点。PLANK脱钙液[7]是一种氯化铝、甲酸、甲醛和冰乙酸组成的混合脱钙液，其中甲酸和溶液中的铝离子对组织影响较小，免疫组化染色效果优良。甲醛可加强对组织的固定并具有抗酸浸蚀的作用。冰乙酸能较好保持染色体结构，并能减少酸对细胞核的破坏。其配制成分中，通过增加甲酸的浓度并用冰乙酸辅助，可以加快脱钙速度。常温下PLANK脱钙液快速软化组织，对组织抗原损伤较少，细胞结构清晰完整，加之其脱钙时间较短、配制简单、经济等有利条件，较适合用于临床检查工作[8]。
CD3、CD68、Ki—67和TTF—1等细胞因子多在肿瘤组织中表达，快速准确的病理诊断有利于患者的临床诊治。因而，选择合适的脱钙液成为重要工作环节之一。本实验通过比较14%硝酸脱钙液、EDTA脱钙液和PLANK脱钙液的脱钙和免疫组化染色效果，综合评价认为PLANK脱钙液较适合用于临床快速病理诊断。
[参考文献]
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