STAT3基因与MMP-2、MMP-9在乳腺浸润性导管癌中的表达及其相互关系(1)
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[摘要] 目的 磷酸化信号传导与转录激活因子3蛋白与乳腺浸润性导管癌中上皮间质转化(EMT)关系密切，EMT需要降解细胞外基质(ECM)，而基质金属蛋白酶(MMPs)是降解ECM和基底膜(BM)的主要执行者。本研究从EMT角度探讨磷酸化信号传导与转录激活因子3(STAT3)基因与MMP-2、MMP-9蛋白在乳腺浸润性导管癌中的表达及其意义。方法 应用RT-PCR技术检测30例新鲜乳腺癌及癌旁组织标本的STAT3基因的表达，并以免疫组化方法检测70例乳腺浸润性导管癌组织中pSTAT3、MMP-2和MMP-9的表达，分析pSTAT3蛋白与MMP-2、MMP-9表达的关系及其与临床病理参数的关系。 结果 STAT3mRNA在乳腺癌标本中相对浓度为0.526±0.312，癌旁组织为0.197±0.161，两组间有显著统计学差异(P < 0.05)；pSTAT3、MMP-2、MMP-9在乳腺浸润性导管癌中阳性表达率分别为62.9%、72.8%、67.1%，明显高于正常乳腺组织19.2%、26.9%、34.6%，具有显著统计学差异(P 均< 0.05)。MMP-2、MMP-9在不同年龄、肿瘤大小、ER、PR表达组之间比较，差异无统计学意义，而在不同组织学分级、有无淋巴结转移之间，MMP-2、MMP-9表达有显著差异(P均<0.05)。 结论 STAT3基因及pSTAT3 与 MMP-2、MMP-9表达在乳腺癌中呈正相关，STAT3基因及pSTAT3和MMP-2 、MMP-9的高表达与乳腺癌的组织学分级与淋巴结转移相关，STAT3基因可能通过调节MMP-2、MMP-9的表达介导EMT从而促进乳腺浸润性导管癌的侵袭转移。
[关键词] 乳腺浸润性导管癌；信号传导与转录激活因子3；基质金属蛋白酶-2；基质金属蛋白酶-9；上皮间质转化；荧光定量PCR
[中图分类号] R737.9 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701(2012)29-0058-04
乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，在全球每年新发的120多万例乳腺癌患者中，约有20万死于乳腺癌的转移[1]。而上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)的发生被认为是上皮来源的癌细胞发生局部浸润及远处转移的首要事件。EMT是指上皮细胞向间质细胞转化的复杂过程，在此过程中上皮细胞的极性消失、迁移和运动能力增强同时伴有上皮细胞标志物的丢失而间质细胞标志物的过度表达[2]。目前较为公认的调控EMT的关键性转录因子主要包括Snail、Smad相互作用蛋白(smad interactionprotein 1，SIP1)和Twist等，新近研究发现信号传导与转录激活因子3(signal transduction and activators of transcription 3，STAT3)信号活化也与肿瘤的EMT有关[3，4]。我们前期的研究也证实在浸润性乳腺导管癌中pSTAT3与EMT密切相关，活化的STAT3可能通过介导EMT促进乳腺浸润性导管癌的侵袭转移[5]。上皮间质转化需要降解细胞外基质(extracellular matrix，ECM)，而基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMPs)是降解ECM和基底膜(basement membrane，BM)的主要执行者。我们设计通过检测STAT3基因及MMPs重要家族成员MMP-2，9蛋白的表达，旨在从EMT角度继续探讨STAT3基因与MMP-2，9蛋白在乳腺浸润性导管癌中的表达及其意义。
1材料与方法
1.1标本收集
收集温州市中西医结合医院与温州医学院附属第一医院2011年1～12月行乳腺根治术切除的有完整临床及病理资料的乳腺浸润性导管癌病例70例为研究组，26例癌旁正常组织为对照组。另取术中冰冻证实为乳腺浸润性导管癌的新鲜乳腺癌及癌旁组织30例，液氮冻存，备RT-PCR实验。
手术后尽快地收集组织标本，避免RNA降解。剔除肿瘤的坏死部分、肌肉及脂肪，确保取材的质量。在尽可能远离肿瘤的部位(>2 cm)取癌旁组织。先将标本置入冻存管于液氮中速冻，然后移入-80℃低温冰箱保存备用。
1.3总RNA的提取及逆转录为cDNA
标本在盛有液氮的研钵中碾碎后，按RNAeasy试剂盒说明提取总RNA。用紫外分光光度计和甲醛琼脂糖变性电泳对提取的总RNA进行纯度和含量鉴定。OD260/OD280值显示在1.8～2.0之间。用逆转录试剂盒将2 μg总RNA逆转为cDNA，以上步骤均按试剂盒说明操作。
1.4实时定量PCR检测
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