亚甲蓝病毒灭活新鲜冰冻血浆制备冷沉淀的有效成分分析
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[摘要] 目的 探讨亚甲蓝灭活后新鲜冰冻血浆制备冷沉淀的可行性。 方法 通过比较同源新鲜冰冻血浆在灭活前后制备的冷沉淀的质量得出结论。 结果 亚甲蓝灭活后新鲜冰冻血浆制备的冷沉淀，FⅧ、Fbg含量均有所降低，其中FⅧ留存率为(62.5±8.8)%，Fbg留存率(62.0±11.7)%，而vWF、FⅩⅢ、Fn与同源未灭活新鲜冰冻血浆制备的冷沉淀比较，差异无统计学意义。 结论 用亚甲蓝灭活后新鲜冰冻血浆制备的冷沉淀，两种主要成分FⅧ和Fbg含量均有损失，如果从降低输注冷沉淀传染病毒风险的角度考虑，则应对病毒灭活冷沉淀降低标准，加大临床输血量。
[关键词] 亚甲蓝；病毒灭活；冷沉淀；可行性
[中图分类号] R457 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701(2012)36-0101-02
冷沉淀因富含凝血因子Ⅷ(FⅧ)、纤维蛋白原(Fbg)、瑞斯托霉素因子(vWF)、纤维蛋白稳定因子(FⅩⅢ)、纤维结合蛋白(Fn)等有效成分，被广泛用于出血性疾病的治疗。但因冷沉淀易造成输血传染性疾病的发生，在所有血液制品中，输注冷沉淀传染病毒的风险高于血浆及红细胞和血小板[1]。因此，冷沉淀的输注安全与输注有效性缺一不可，采取有效措施两者兼顾尤为重要。本课题通过比较同源新鲜冰冻血浆在灭活前后制备冷沉淀的质量评价分析血浆灭活后制备冷沉淀的可行性，现报道如下。
1 材料与方法
1.1 设备与试剂
日本CA530血凝仪；试剂包括乏FⅧ批号：546545、APTT批号：547118、CaCl2批号：549448；正常参比血浆批号：503222A；Fbg批号：40938、FN批号：201205；FⅩⅢ批号：201205；vWF批号：201205；威高WG-LRH-I型低温融化箱；日立大容量离心机；亚特斯全自动酶免仪；上海医用病毒灭活柜及配套病毒灭活袋。
1.2 方法
1.2.1 原料血浆的制备 采用Q-400血袋采集CPDA-1 抗凝血液400 mL，尽快分离新鲜血浆。随机抽取新鲜血浆20袋，每袋均分为100 mL×2，分别作为新鲜冰冻血浆组(甲组)和病毒灭活新鲜冰冻血浆组(乙组)。甲组快速置于-50℃速冻机中速冻，-30℃冰柜保存备用；乙组用MB/光化学法进行病毒灭活后，采用与甲组相同的方式速冻并保存备用。所有操作在采血后6 h内完成。
1.2.2 冷沉淀的制备 将上述两组冰冻后血浆在完全相同的条件下制备甲、乙两组冷沉淀，快速置于-50℃速冻机中速冻，-30℃冰柜保存备用。
1.2.3 留样与检测 将上述两组冷沉淀取出，37 ℃融化并称重，混匀后留样5 mL，分别检测FⅧ、Fbg、vWF、FⅩⅢ、Fn的含量。
1.3 统计学处理
应用SPSS11.5统计软件对数据进行统计处理，采用t检验对两样本均数进行比较，P < 0.05具有统计学意义。
2 结果
病毒灭活新鲜冰冻血浆制备的冷沉淀，FⅧ、Fbg含量均有所降低，差异有统计学意义(P < 0.05)，其中FⅧ留存率为(62.5±8.8)%，Fbg留存率(62.0±11.7)%，而vWF、FⅩⅢ、Fn与同源新鲜冰冻血浆制备的冷沉淀比较，差异无统计学意义(P > 0.05)。见表1。
3 讨论
目前，国内采供血机构普遍采用亚甲蓝对血浆进行病毒灭活，已取得了良好的效果，灭活后血浆既保证了输血的安全性，有效性又在可控范围当中，但对血浆衍生产品冷沉淀的病毒灭活仍处于探索阶段。
从本课题可以看出，新鲜冰冻血浆经亚甲蓝灭活后制备的冷沉淀， 血浆FⅧ和Fbg含量均有所降低，分析其原因，FⅧ属不稳定凝血因子，由于病毒灭活过程在2～10℃环境进行，灭活时间为30 min，延迟了血浆速冻的时间，导致其活性降低；Fbg属稳定的凝血因子，时间延迟对其影响较FⅧ小，但用输血过滤器吸附过滤亚甲蓝过程中，会吸附一部分，导致其含量降低[3]。因此，用病毒灭活新鲜冰冻血浆制备冷沉淀，会影响冷沉淀输注的有效性。
2012年7月1日实施的《全血及成分血质量要求(GB18469-2012)》对病毒灭活新鲜冰冻血浆制定了相关标准，采用亚甲蓝病毒方法灭活的新鲜冰冻血浆要求FⅧ≥0.5 IU/mL，较未灭活的新鲜冰冻血浆减少了0.2 IU/mL，降低了约30%，与文献报道大致相同[4]，对病毒灭活新鲜冰冻血浆制备冷沉淀则未做出相关规定。本次试验结论显示，病毒灭活新鲜冰冻血浆制备冷沉淀，FⅧ和Fbg下降幅度均值为38%，20袋灭活冷沉淀中有5袋未达到现有未灭活冷沉淀凝血因子标准(来源于200 mL全血：≥40 IU)[5]，灭活后纤维蛋白原则有18袋未达到标准(来源于200 mL全血：≥75 mg )。
综上所述，从降低输血传播病毒风险的角度，应该对冷沉淀进行病毒灭活，但从产品质量方面考虑，使用病毒灭活新鲜冰冻血浆制备冷沉淀，则需要制定新的质量标准，降低FⅧ、Fbg含量。同时为最大限度提高凝血因子留存率，血站应对冷沉淀的制备环节严格控制，如选用CPDA配方抗凝剂，缩短采血、制备、保存时间，加强冷链管理均有利于提高冷沉淀产品质量。医院应根据病人需要掌握冷沉淀融化的温度、时间，融化后最短时间输注，均可减少凝血因子损失，还可根据病人情况适当加大用量以保证疗效 ......
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