DPC4蛋白在结肠癌组织中表达及其临床意义
[摘要] 目的 探讨DPC4蛋白在结肠癌组织中表达及其临床意义。 方法 采用免疫组化S-P法检测60例结肠癌标本中DPC4蛋白的表达，并探讨其与患者的生物学行为及预后的关系。同时选择30例癌旁正常结肠组织(距肿瘤边缘>5 cm)作为对照。 结果 DPC4蛋白在结肠癌标本中的阳性率明显低于癌旁正常结肠组织(χ2=31.42，P < 0.01)。结肠癌组织中DPC4蛋白表达水平随组织分化程度的增加而增加(P < 0.01)，随肿瘤大小、临床分期的提高和淋巴结的转移而呈逐渐下降趋势(P < 0.01或P < 0.05)。 结论 DPC4基因在结肠癌的发生、发展、转移和预后中起重要作用，与患者的生物学行为和预后具有明显相关性，有望成为结肠癌基因诊断和治疗的新靶点。
[关键词] 结肠癌；免疫组化；DPC4蛋白；生物学行为；预后
[中图分类号] R735.34 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701(2013)02-0031-02
结肠癌的发生和发展是多阶段、多基因参与的病理过程，其中癌基因的激活以及抑癌基因的缺失导致的细胞异常增殖是该病理过程中的重要分子机制[1]。DPC4是一种新发现的抑癌基因，近年来研究发现DPC4基因的表达缺失在癌细胞的生长分化中起着负性调节的作用[2]。本研究观察了DPC4蛋白在60例结肠癌标本中的表达及其与患者的生物学行为及预后的关系，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 临床资料
选择2006年1月～2011年12月在我院手术治疗并有完整临床病理资料的结肠癌组织标本60例，其中男35例，女25例，年龄34～85岁，平均(64.7±7.1)岁。所有患者术前均未接受任何形式的化疗、免疫及放疗。同时选择30例癌旁正常结肠组织(距肿瘤边缘>5 cm)作为对照。
1.2 免疫组化染色
采用免疫组化S-P法检测石蜡标本中DPC4蛋白的表达，根据试剂盒中所附的实验操作步骤进行操作。用正常未免疫兔血清代替一抗作阴性对照，用PBS代替一抗作空白对照，以正常扁桃体组织作阳性对照。其中S-P免疫组化试剂盒和兔抗人DPC4多克隆抗体由北京中杉金桥生物公司提供。
1.3 结果观察
以细胞浆内出现棕黄色颗粒定为阳性细胞。按高倍镜视野下计数细胞的染色强度进行记分，其中无色记0分、浅色记1分、棕黄色记2分，褐色记3分；同时再根据阳性细胞所占的比例进行记分，其中阴性记0分，阳性细胞比例≤10%记1分，阳性细胞比例在11%～50%之间记2分，阳性细胞比例在51%～75%之间记3分，阳性细胞比例>75%记4分。染色强度记分和阳性细胞比例记分的乘积≥2分即为DPC4表达(+)[3]。
1.4 统计学处理
应用SPSS 13.0统计学软件，计量资料以均数±标准差(x±s)表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 DPC4蛋白在结肠癌及癌旁正常组织中的表达
60例结肠癌标本中DPC4的阳性表达为23例(38.3%)。30例癌旁正常结肠标本DPC4蛋白表达均呈阳性。DPC4蛋白在结肠癌标本中的阳性率明显低于癌旁正常结肠组织(χ2=31.42，P < 0.01)。见图1。
2.2 结肠癌标本中DPC4蛋白的表达与生物学行为关系
结肠癌标本中DPC4蛋白表达水平与患者的性别和年龄均无明显关系(P > 0.05)。结肠癌标本中DPC4蛋白表达水平随组织分化程度的增加而增加(P < 0.01)，随肿瘤大小、临床分期的提高和淋巴结的转移而呈逐渐下降趋势(P < 0.01或P < 0.05)。见表1。
2.3 DPC4蛋白在结肠癌中的表达与预后的关系
60例大肠癌中随访3年以上41例(DPC蛋白的阳性表达为25例)，其中存活22例，因肿瘤复发、转移而死亡19例。DPC蛋白阳性表达组的3年生存率为76.0%(19/25)，DPC蛋白阴性表达组的3年生存率为18.8%(3/16)。DPC蛋白阳性表达组的3年生存率明显高于DPC蛋白阴性表达组(χ2=12.86，P < 0.01)。
3 讨论
结肠癌是常见的消化道癌症，近年来发病率有逐年上升的趋势。研究已证实大肠癌的发生、发展是一个错综复杂的分子病理过程，包含环境和基因缺陷等诸多因素。DPC4是一个新发现的抑癌基因，定位于染色体18q21.1，含有11个外显子和10个内含子，编码552个氨基酸残基组成的DPC4蛋白[4]。目前认为DPC4蛋白是TGFβ信号传导的桥梁。DPC基因缺失，对TGFβ基因的抑制减弱，从事抗凋亡功能的细胞永生化形成肿瘤，且可使与细胞结合的有关的DNA活性下降，导致TGFβ通路的基因转录发生失活，造成细胞永生化形成肿瘤[5]。DPC4基因在多种人类肿瘤的发病中的重要作用而备受临床重视[6]。
DPC4基因与结肠癌的病因及发病机制密切相关。谢忠士等[7]研究发现DPC4蛋白在癌旁组织中均呈强阳性表达，而在结肠癌组织中的表达较低，且随着肿瘤临床分期的增加而逐渐降低，但与年龄和肿瘤的部位无关。表明DPC4蛋白在结肠癌的形成、浸润、转移及预后中起重要作用。曲洪滨等[8]研究发现大肠癌组织DPC4蛋白表达程度明显低于正常大肠组织，与大肠癌组织的细胞分化程度、临床分期及淋巴结转移等生物学行为特征密切相关。表明DPC4蛋白表达与大肠癌密切相关，可作为大肠癌诊断和治疗的生物学标记物。本研究结果发现结肠癌标本中DPC4蛋白的表达呈现降低或缺失状态，阳性率明显低于癌旁正常结肠组织，且结肠癌组织中DPC4表达水平随组织分化程度的增加而增加，随临床分期的提高和淋巴结的转移而呈逐渐下降趋势。表明DPC4蛋白表达在结肠癌的浸润及转移中起重要作用，随着结肠癌的浸润及转移的程度，DPC4蛋白表达呈下降或缺失状态。DPC4可作为结肠癌诊断和治疗的重要生物学标记物。
总之，DPC4基因在结肠癌的发生、发展、转移和预后中起重要作用，与患者的生物学行为和预后具有明显相关性，有望成为结肠癌基因诊断和治疗的新靶点。
[参考文献]
[1] 朱小三. 大肠癌相关抑癌基因的研究进展[J]. 军医进修学院学报，2011，32(5)：536-538.
[2] Maitra A，Molberg K，Albores-Saavedra J，et al. Loss of dpc4 expression in colonic aden carcinomas correlates with the presence of metstatic disease[J]. Am J Pathology，2000，157(4)：1105-1108.
[3] 方小斌. Livin蛋白在大肠癌组织中的表达及其与患者临床病理特征的关系[J]. 中国现代医生，2012，50(4)：112-113.
[4] 唐朝晖，邹声泉，杨想平，等. DPC4 蛋白在不同病理分期的结肠肿瘤中的表达[J]. 世界华人消化杂志，2003，11(10)：1654-1656.
[5] 周海波，张居民，颜云，等. 结直肠癌组织中 DPC4基因的分子生物学研究[J]. 世界华人消化杂志，2002，10(10)：1140.
[6] 罗庚求，李景和，陈永平，等. DPC4基因转染对结肠癌血管生成的影响[J]. 世界华人消化杂志，2004，12(3)：580-584.
[7] 谢忠士，宋燕，刘志毅，等. 抑癌基因DPC4在结肠癌蛋白的表达及临床意义[J]. 中国实验诊断学，2008，12(2)：245-246.
[8] 曲洪滨，付晓光，高志安，等. 大肠癌组织中抑癌基因DPC4和PTEN蛋白表达意义的研究[J]. 锦州医学院学报，2006，27(1)：1-4.
(收稿日期：2012-08-02), 百拇医药(韩红萍 翟梅娟)
[关键词] 结肠癌；免疫组化；DPC4蛋白；生物学行为；预后
[中图分类号] R735.34 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701(2013)02-0031-02
结肠癌的发生和发展是多阶段、多基因参与的病理过程，其中癌基因的激活以及抑癌基因的缺失导致的细胞异常增殖是该病理过程中的重要分子机制[1]。DPC4是一种新发现的抑癌基因，近年来研究发现DPC4基因的表达缺失在癌细胞的生长分化中起着负性调节的作用[2]。本研究观察了DPC4蛋白在60例结肠癌标本中的表达及其与患者的生物学行为及预后的关系，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 临床资料
选择2006年1月～2011年12月在我院手术治疗并有完整临床病理资料的结肠癌组织标本60例，其中男35例，女25例，年龄34～85岁，平均(64.7±7.1)岁。所有患者术前均未接受任何形式的化疗、免疫及放疗。同时选择30例癌旁正常结肠组织(距肿瘤边缘>5 cm)作为对照。
1.2 免疫组化染色
采用免疫组化S-P法检测石蜡标本中DPC4蛋白的表达，根据试剂盒中所附的实验操作步骤进行操作。用正常未免疫兔血清代替一抗作阴性对照，用PBS代替一抗作空白对照，以正常扁桃体组织作阳性对照。其中S-P免疫组化试剂盒和兔抗人DPC4多克隆抗体由北京中杉金桥生物公司提供。
1.3 结果观察
以细胞浆内出现棕黄色颗粒定为阳性细胞。按高倍镜视野下计数细胞的染色强度进行记分，其中无色记0分、浅色记1分、棕黄色记2分，褐色记3分；同时再根据阳性细胞所占的比例进行记分，其中阴性记0分，阳性细胞比例≤10%记1分，阳性细胞比例在11%～50%之间记2分，阳性细胞比例在51%～75%之间记3分，阳性细胞比例>75%记4分。染色强度记分和阳性细胞比例记分的乘积≥2分即为DPC4表达(+)[3]。
1.4 统计学处理
应用SPSS 13.0统计学软件，计量资料以均数±标准差(x±s)表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 DPC4蛋白在结肠癌及癌旁正常组织中的表达
60例结肠癌标本中DPC4的阳性表达为23例(38.3%)。30例癌旁正常结肠标本DPC4蛋白表达均呈阳性。DPC4蛋白在结肠癌标本中的阳性率明显低于癌旁正常结肠组织(χ2=31.42，P < 0.01)。见图1。
2.2 结肠癌标本中DPC4蛋白的表达与生物学行为关系
结肠癌标本中DPC4蛋白表达水平与患者的性别和年龄均无明显关系(P > 0.05)。结肠癌标本中DPC4蛋白表达水平随组织分化程度的增加而增加(P < 0.01)，随肿瘤大小、临床分期的提高和淋巴结的转移而呈逐渐下降趋势(P < 0.01或P < 0.05)。见表1。
2.3 DPC4蛋白在结肠癌中的表达与预后的关系
60例大肠癌中随访3年以上41例(DPC蛋白的阳性表达为25例)，其中存活22例，因肿瘤复发、转移而死亡19例。DPC蛋白阳性表达组的3年生存率为76.0%(19/25)，DPC蛋白阴性表达组的3年生存率为18.8%(3/16)。DPC蛋白阳性表达组的3年生存率明显高于DPC蛋白阴性表达组(χ2=12.86，P < 0.01)。
3 讨论
结肠癌是常见的消化道癌症，近年来发病率有逐年上升的趋势。研究已证实大肠癌的发生、发展是一个错综复杂的分子病理过程，包含环境和基因缺陷等诸多因素。DPC4是一个新发现的抑癌基因，定位于染色体18q21.1，含有11个外显子和10个内含子，编码552个氨基酸残基组成的DPC4蛋白[4]。目前认为DPC4蛋白是TGFβ信号传导的桥梁。DPC基因缺失，对TGFβ基因的抑制减弱，从事抗凋亡功能的细胞永生化形成肿瘤，且可使与细胞结合的有关的DNA活性下降，导致TGFβ通路的基因转录发生失活，造成细胞永生化形成肿瘤[5]。DPC4基因在多种人类肿瘤的发病中的重要作用而备受临床重视[6]。
DPC4基因与结肠癌的病因及发病机制密切相关。谢忠士等[7]研究发现DPC4蛋白在癌旁组织中均呈强阳性表达，而在结肠癌组织中的表达较低，且随着肿瘤临床分期的增加而逐渐降低，但与年龄和肿瘤的部位无关。表明DPC4蛋白在结肠癌的形成、浸润、转移及预后中起重要作用。曲洪滨等[8]研究发现大肠癌组织DPC4蛋白表达程度明显低于正常大肠组织，与大肠癌组织的细胞分化程度、临床分期及淋巴结转移等生物学行为特征密切相关。表明DPC4蛋白表达与大肠癌密切相关，可作为大肠癌诊断和治疗的生物学标记物。本研究结果发现结肠癌标本中DPC4蛋白的表达呈现降低或缺失状态，阳性率明显低于癌旁正常结肠组织，且结肠癌组织中DPC4表达水平随组织分化程度的增加而增加，随临床分期的提高和淋巴结的转移而呈逐渐下降趋势。表明DPC4蛋白表达在结肠癌的浸润及转移中起重要作用，随着结肠癌的浸润及转移的程度，DPC4蛋白表达呈下降或缺失状态。DPC4可作为结肠癌诊断和治疗的重要生物学标记物。
总之，DPC4基因在结肠癌的发生、发展、转移和预后中起重要作用，与患者的生物学行为和预后具有明显相关性，有望成为结肠癌基因诊断和治疗的新靶点。
[参考文献]
[1] 朱小三. 大肠癌相关抑癌基因的研究进展[J]. 军医进修学院学报，2011，32(5)：536-538.
[2] Maitra A，Molberg K，Albores-Saavedra J，et al. Loss of dpc4 expression in colonic aden carcinomas correlates with the presence of metstatic disease[J]. Am J Pathology，2000，157(4)：1105-1108.
[3] 方小斌. Livin蛋白在大肠癌组织中的表达及其与患者临床病理特征的关系[J]. 中国现代医生，2012，50(4)：112-113.
[4] 唐朝晖，邹声泉，杨想平，等. DPC4 蛋白在不同病理分期的结肠肿瘤中的表达[J]. 世界华人消化杂志，2003，11(10)：1654-1656.
[5] 周海波，张居民，颜云，等. 结直肠癌组织中 DPC4基因的分子生物学研究[J]. 世界华人消化杂志，2002，10(10)：1140.
[6] 罗庚求，李景和，陈永平，等. DPC4基因转染对结肠癌血管生成的影响[J]. 世界华人消化杂志，2004，12(3)：580-584.
[7] 谢忠士，宋燕，刘志毅，等. 抑癌基因DPC4在结肠癌蛋白的表达及临床意义[J]. 中国实验诊断学，2008，12(2)：245-246.
[8] 曲洪滨，付晓光，高志安，等. 大肠癌组织中抑癌基因DPC4和PTEN蛋白表达意义的研究[J]. 锦州医学院学报，2006，27(1)：1-4.
(收稿日期：2012-08-02), 百拇医药(韩红萍 翟梅娟)