凋亡抑制蛋白Livin在结肠癌组织中的表达及与细胞增殖的关系(2)
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1 资料与方法
1.1 一般资料
本研究共选取了结肠癌患者术后病理标本70份。所有患者具有完整临床资料，术前均未进行任何形式的辅助化疗、放疗和免疫治疗。70例患者中男43例，女27例；年龄34 ～87岁，平均(65.4±7.6)岁。另取30例癌旁正常的结肠组织(距肿瘤边缘5 cm以上的组织)作对照，其中男19例，女11例；年龄36 ～84岁，平均(64.9±7.1)岁。两组在性别、年龄方面比较差异不明显(P>0.05)，具有可比性。
1.2 免疫组化染色[5]
采用S-P免疫组化法进行染色检测。将手术标本进行石蜡包埋，切片机连续4μm切片，采用柠檬酸盐高压抗原修复，正常血清阻断封闭10min，倾去血清滴加Livin和PCNA一抗工作液4℃冰箱中孵育过夜，余按说明书操作规范进行操作。用正常扁桃腺组织和磷酸盐缓冲液PBS行阳性或阴性对照。鼠抗人Livin单克隆抗体和鼠抗人PCNA单克隆抗体由北京中杉金桥公司提供。免疫组化S-P试剂盒由武汉博士德提供。
1.3 观察指标
1.3.1 Livin免疫组化结果判定[6] Livin阳性表达细胞是指细胞浆或细胞浆与细胞核均出现黄色至棕褐色颗粒状染色。按照染色细胞的百分比判断免疫组化结果，其中细胞染色不明显或染色细胞的百分比≤10%为阴性(-)；染色细胞的百分比>10%为阳性(+)。
1.3.2 PCNA的细胞增殖指数的测定[7] 采用HPIAS-1000高清晰度彩色病理图文分析系统，将PCNA染色阳性的每张免疫组化切片选择10个高倍区域，选取1000个肿瘤细胞计数PCNA染色阳性细胞所占的比例即为PCNA的细胞增殖指数 ......
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