按照Lipofectamine 2000转染试剂盒说明书将UPP、PTEN质粒和空载体分别转染进入HepG2细胞。转染前1 d，细胞铺板于100 mm培养皿中，使其转染日密度为90%。转染试剂用Opti-MEM无血清培养基稀释，细胞也用Opti-MEM无血清培养基孵育。转染6 h后，转染培养基换成完全培养基包含10%FBS和抗生素。细胞转染48 h后，提取蛋白。

    1.3 蛋白印迹法(Western blot)检测

    收集对数生长期的各细胞株，分别用含蛋白酶抑制剂的RIPA细胞裂解液裂解，提取蛋白并定量。取50 μg总蛋白进行SDS-PAGE凝胶电泳，转膜后以5%脱脂牛奶封闭30 min，在1∶1000浓度的Anti-Human PTEN (clone 6H2.1) 抗体及1∶400浓度 α-Actin、GAPDH抗体中室温孵育2 h，TBST洗涤3次以后，1∶2000浓度的兔抗人IgG以及1∶1000猴抗羊IgG、羊抗鼠IgG二抗室温孵育1.5 h ......