1.3 冷冻胚胎的标准

    参照文献[3]的卵裂期胚胎分级方法并结合本中心实际工作将D3胚胎分为4级：Ⅰ级胚胎卵裂球均匀，胚胎无碎片或有少量碎片(<5%)；Ⅱ级胚胎卵裂球均匀，胚胎碎片<20%；Ⅲ级胚胎卵裂球均匀或不均匀，胚胎碎片<50%；Ⅳ级胚胎卵裂球均匀或不均匀，胚胎碎片≥50%。中心规定Ⅰ～Ⅲ级胚胎予以冷冻，Ⅳ级胚胎不予冷冻。囊胚冷冻标准为第5、6天发育到4BC或4BC以上的胚胎方可进行玻璃化冷冻。

    1.4 玻璃化冷冻

    在室温下(24℃)将1～2个胚胎移入平衡液中(equilibration solution，ES)，预平衡6～7 min(卵裂期胚胎)/8～10 min(囊胚)后，再将ES中的胚胎移入玻璃化冷冻液(vitrification solution，VS)，充分混匀后在60 s以内将胚胎迅速放置冷冻载杆(cryotop)顶端标记位置，并将载杆投入液氮装管保存。

    1.5 玻璃化解冻

    把冷冻载杆(cryotop)从液氮中取出，将顶端迅速放入37℃预热的解冻液(thawing solution，TS)中60 s，再将解冻后的胚胎依次移入稀释液(diluent solufion，DS)、洗液1(washing solution l，WS1)和洗液2(washing solution 2 ......