CCR9对乳腺癌细胞MCF—7增殖和侵袭的影响(2)
1.3.2 构建pEGFP-N2-CCR9 质粒与转染MCF-7细胞株 取正常人手术切除扁桃体标本，提取总RNA，在引物前后各加入BglII和SalI酶切位点，Taq酶扩增CCR9的基因，取扩增产物在2%琼脂糖凝胶电泳。将产物和pEGFP-N2质粒酶切，电泳回收并用T4连接酶连接，再将质粒进行细菌转化，摇菌并提取质粒。用1640培养基液稀释质粒和脂质体混匀并孵育20 min加入细胞培养液中，继续孵育培养。
1.3.3 免疫印迹检测CCR9蛋白表达 细胞裂解液提取细胞蛋白，100℃变性10 min并用免疫印迹电泳。用5%BSA将NC膜孵育0.5 h，加入β-actin或CCR9抗体与NC膜孵育1 h。用PBS溶液洗4次，加入HRP二抗，孵育0.5 h，PBS溶液洗4次，最后显影。
1.3.4 检测CCR9对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响 MCF-7细胞和MCF-7-CCR9细胞接种于6孔板中，当细胞生长到1、2和3 d 时，每一孔加入10 μL CCK-8并于在培养箱中孵育45 min，然后酶标仪450 nm处检测吸光度值。
1.3.5 检测CCR9对乳腺癌MCF-7细胞侵袭的影响 将MCF-7或MCF-7-CCR9细胞分别接种到含有基质胶的Transwell板上 ......
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1.3.3 免疫印迹检测CCR9蛋白表达 细胞裂解液提取细胞蛋白，100℃变性10 min并用免疫印迹电泳。用5%BSA将NC膜孵育0.5 h，加入β-actin或CCR9抗体与NC膜孵育1 h。用PBS溶液洗4次，加入HRP二抗，孵育0.5 h，PBS溶液洗4次，最后显影。
1.3.4 检测CCR9对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响 MCF-7细胞和MCF-7-CCR9细胞接种于6孔板中，当细胞生长到1、2和3 d 时，每一孔加入10 μL CCK-8并于在培养箱中孵育45 min，然后酶标仪450 nm处检测吸光度值。
1.3.5 检测CCR9对乳腺癌MCF-7细胞侵袭的影响 将MCF-7或MCF-7-CCR9细胞分别接种到含有基质胶的Transwell板上 ......
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