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编号:13049819
干扰素—γ诱导蛋白10在子痫前期孕妇血清和胎盘组织中的表达及意义(2)
http://www.100md.com 2017年5月25日 《中国现代医生》 2017年第15期
     1.2 方法

    1.2.1 血清IP-10水平的检测 采取双抗体夹心 ELISA法,按试剂盒(美国 R&D 公司)说明书进行操作,用Elx800型全自动酶标仪(美国 VARIOSKAN FLASH Thermo 公司)检测获得OD 450 值,根据标准曲线算出水平。

    1.2.2 胎盘组织IP-10蛋白表达量的检测 采取Western blot法,在提取胎盘组织总蛋白后,用 Bradford 法测定其浓度,并将各标本调整到相同蛋白浓度。用SDS-PAGE 电泳蛋白,电转移到PVDF 膜(北京中杉金桥生物技术有限公司),4℃封闭过夜。以 1∶2500的比例稀释多克隆抗体(北京冬歌生物),4℃孵育过夜,用TBST 缓冲液洗膜 3 次。将漂洗好的膜放置在1∶2000稀释的二抗HRP-羊抗兔 IgG(北京冬歌生物)中,在37℃下孵育2 h,ECL显色试剂盒(美国 Abcam 公司)显示胶片感光显影。用 Image J 软件扫描胶片上的图像,获得灰度值,用积分光密度法统计Western blot结果 ......
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