周露丹 范海玲 王丽珍 梁国安

    台州恩泽医疗中心(集团)台州医院儿内科，浙江临海 317000

    新生儿缺氧缺血性脑损伤(hypoxic ischemic encephalopathy，HIE)，又称新生儿缺氧缺血性脑病，主要是指围生期新生儿由各种因素导致的缺氧缺血性脑损伤综合征。新生儿缺氧缺血性脑损伤可以诱发临床新生儿的早期死亡、智能障碍、脑性瘫痪者和癫痫等不同程度的脑损伤综合征，可以造成儿童中枢神经系统严重的损害[1，2]。所以如何改善预后，提高儿童生存质量，已引起了各国政府和学者的高度重视。目前国内临床多采用维持脑内能量代谢平衡、促进神经营养因子分泌和抗神经元细胞凋亡等药物治疗结合高压氧、亚低温等综合治疗方案，并强调早期干预的重要性[3，4]。然而，这些药物虽达到了一定治疗HIE的效果，但当中枢神经系统神经元大面积损伤时，神经元的再生与突触联系明显减弱，中枢神经系统的功能难以修复。实验发现，CD34+造血细胞可以用来治疗新生儿缺氧缺血性脑病，但限于CD34+造血细胞数量限制，不能广泛应用[5，6]。本研究基于目前最新研究成果，以脐带血为研究对象，建立体外人造血干细胞(CD34+)增殖模型，筛选出能够在体外未分化状态下促进其扩增的新型小分子，以期最终获得一系列对体外扩增人CD34+造血干细胞行之有效的化合物，探讨脐血CD34+干细胞治疗新生儿缺氧缺血性脑病的效果和机制，为临床应用提供可行性依据。

    1 材料与方法

    1.1 扩增CD34+造血干细胞的化合物筛选与鉴定

    采用密度梯度离心法结合免疫磁珠分选法获得单个核细胞，再采取MACS技术分离得CD34+造血干细胞，用FACScan检测CD34+比例，加入合成的化合物，进行体外培养14 d，继续用FACScan检测增殖水平。选取扩增倍数高、分化低的化合物SR1处理后的CD34+造血干细胞的培养，采用FACScan检测培养后细胞生物学表型变化情况，然后与缺血缺氧后的神经元细胞共培养，检测神经元细胞增殖、迁移等方面的能力。

    1.2 新生鼠缺氧缺血性脑病模型的建立

    选取90只7日龄SD大鼠构建大鼠缺氧缺血动物模型并随机分为三组(每组30只)：对照组、模型组和治疗组。通过改良后的Rice法建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型。用6%水合氯醛腹腔麻醉新生SD大鼠(5 mL/kg)，颈正中切口，结扎右侧颈总动脉，造成缺血。术后约恢复2 h将新生SD大鼠置于恒温密闭的缺氧箱中，并给予持续2 h通入 8%O2+92%N2的混合气体(气流量2 L/min) ......