当前位置: 首页 > 期刊 > 《中国现代医生》 > 2019年第34期
编号:13434583
抑制JNK通路对Genistein诱导结肠癌SW620细胞周期阻滞的作用(3)
http://www.100md.com 2019年12月5日 《中国现代医生》 2019年第34期
     1.3.3 蛋白质印记法检测G2/M期相关蛋白的表达 细胞以5×105个/孔接种于6孔板,培养24 h后,加入第二系列不同处理因素的培养液2 mL,处理24 h后,收集细胞,抽提细胞蛋白,然后用BCA蛋白定量微孔检测法进行蛋白定量,调整样品蛋白浓度为2 μg/μL,样品蛋白煮沸变性(过程同1.3.2)。取各组样品蛋白30 μg上样,经SDS-PAGE电泳分离后,转移至NC膜上,封闭液封闭2 h,TBS洗涤3次,一抗Cyclin B1(1∶1 000)、P-Cdc2(1∶1 000)、Cdc2(1∶1 000)和β-actin(1∶400)4℃孵育过夜,TBST洗涤3次,HRP标记二抗室温摇床2 h,TBS洗涤2次,TBST洗涤1次,ECL发光,于天能数码凝胶分析仪显影拍摄,并分析目的蛋白的相对灰度值的差异。

    1.3.4 MTS法检测细胞增殖 细胞以8×103个/孔接种于96孔板,培养24 h后,加入第三系列不同处理因素的培养液150 μL,处理24 h后,加入MTS,每孔7.5 μL ......
上一页1 2 3 4下一页

您现在查看是摘要页,全文长 4119 字符