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编号:13503412
超声引导下细针穿刺活检联合BRAFV600E基因检测对甲状腺癌的诊断价值分析(2)
http://www.100md.com 2020年2月25日 《中国现代医生》 20206
     BRAFV600E基因检测方法:将超声引导下细针穿刺所提取的组织标本,以10%福尔马林进行固定,于石蜡包埋后,且取5 μm厚度的切片3张,放置于1.5 mL的EP管中。随后以二甲苯进行脱蜡,以FFPE样本DNA分离试剂盒对标本内的DNA进行提取,并测定DNA浓度,以DNA的OD260/OD280介于1.8~2.1為合格DNA。提取DNA后,行PCR扩增,设计BRAFV600E正向引物为5'-TCATAATGCTTGCTCTGATAGGA-3',反向引物为5'-GGCCAAAAATTTAATCAGTGGA-3',扩增片段长度为224 bp。检测分为三个阶段,第一阶段:95℃下5 min,1个循环;第二阶段为95℃下25 s、64℃下20 s、72℃下20 s,15个循环;第三阶段为93℃下25 s、60℃下35 s、72℃下20 s,31个循环。于第三循环中60℃时收集FAM及HEM信号,进行实时PCR,以FAM信号Ct值<28时表示标本BRAFV600E基因突变,判定结果为阳性。

    联合检查结果中以US-FNAB检查结果阳性或BRAFV600E基因检测阳性为诊断阳性 ......
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