APN-AMPK信号通路调节骨代谢作用于激素性股骨头坏死的机制研究(3)
1.4.4 兔股骨头骨细胞中AMPK mRNA表达 将取材的兔股骨头组织取出，向兔股骨头组织中加入1 mL TRIZOL裂解液裂解细胞，按照invitrogen TRIZOL说明书进行RNA提取：向兔股骨头组织中加入1 mL TRIZOL裂解液裂解细胞，用移液枪反复轻柔吹打使细胞裂解。转移细胞至1.5 mL EP管中加入氯仿0.2 mL，充分混匀，室温孵育2 min，4℃低温离心机 12 000 r/min离心10 min。弃去上清液后加入75%的乙醇1 mL，清洗沉淀，12 000 r/min下离心2 min。去除乙醇溶液，室温下干燥沉淀物 5～10 min，加入去离子水，溶解沉淀。取3 μL细胞总RNA采用1%琼脂糖凝胶电泳检测RNA，然后用紫外凝胶成像系统观察，判定RNA完整性。取逆转录试剂盒试剂，测量各RNA浓度，取普通八连管，加入体系：(1)5×primescript RT Enzyme MIX 2 μL/4 μL;(2)Total RNA 500 ng/1 μg(按体系计算体积);(3)RNase Free ddH2O up to 10 μL/up to 20 μL于普通PCR仪上进行逆转录(37℃ 15 min ......
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