粉末油脂过氧化值测定方法的研究(1)
油脂被微胶囊化后，由于囊壁的保护作用，其氧化变质的速度大大减缓，保质期大大延长。但油脂，尤其是含多不饱和脂肪酸的油脂，其氧化、酸败现象仍是客观存在的，所以用于衡量油脂氧化和酸败的指标非常重要。对于普通油脂POV的测定有成熟的国家标准GB/T5009.37-2003。由于微胶囊粉末油脂有层较好的壁材包埋，直接用国家标准方法GB/T5009.37-2003测出的只是粉末油脂析出的少量表面油，而真正能够体现粉末油脂POV被包埋部分的油脂并不能用此法直接测定，要想测定这部分被包埋油脂的POV必须要先破壁。而在破壁过程中是否会对被包埋的油脂造成影响，破壁后测定出来的POV又能否代表粉末油脂的POV。本研究的目的就是要建立一种有效的不会改变油脂POV的破壁方法，破壁后结合国家标准方法GB/T5009.37-2003中的比色法(较国标中滴定法更省时、快速、取样量少)来测定微胶囊粉末油脂的POV。
材料与方法
1、主要试剂
, http://www.100md.com
盐酸溶液(10mol/L)、过氧化氢(30%)、三氯甲烷-甲醇(7：3)混合溶剂、氧化亚铁溶液(3.5g/L)。硫氰酸钾溶液(300g/L)、Fe3+标准储备溶液(1.0g/L)、Fe3+标准使用溶液(0.01g/L)、氨水(25%)、乙醇(95%)。乙醚(不含过氧化物)、石油醚(沸程30～60℃)，均为分析纯：微胶囊粉末油脂、微胶囊粉末油脂原料油(无锡超科食品有限公司提供)。
2、主要仪器
紫外可见分光光度计8500、JY96-II超声波细胞粉碎机。恒温水浴锅、真空干燥箱、研钵、电子分析天平、过滤装置、抽脂瓶、具塞玻璃比色管、容量瓶及常用的玻璃仪器等。
3、实验方法
(1)微胶囊粉末油脂的破壁提油
, 百拇医药 a.碱性乙醚法：称取2g左右的样品，用10mL(60℃)水分数次溶解于抽脂瓶中，加入1.25mL氨水，充分混匀，置60℃水浴中加热5min，再振摇2min，加入10mL乙醇，充分摇匀，于冷水中冷却后，加入25mL乙醚，振摇0.5min，加入25mL石油醚，再振摇0.5min，静置30min，待上层液澄清时，读取醚层体积，放出一定体积醚层于恒重的烧瓶中，蒸馏回收乙醚和石油醚，挥发残余醚后，于80℃真空干燥箱中干燥1.5h，取出放入干燥器中冷却至室温后称重，重复操作至恒重。
b.机械研磨法：称取2g左右的样品于研钵中，分次加入25mL氯仿溶液，充分研磨5min，过滤，将滤液蒸馏，回收所用的提取溶剂，挥发残余溶剂后，于80℃真空干燥箱中干燥1.5h，取出放入干煤器中冷却至室温后称重，重复操作至恒重。
C.超声波破壁法：称取2g左右的样品于50mL小烧杯中，加入25mL氯仿溶液，超声波振荡粉碎4min后过滤，将滤液蒸馏，回收所用的提取溶剂，挥发残余溶剂后，于80℃真空干燥箱中干燥1.5h，取出放入干燥器中冷却至室温后称重，重复操作至恒重。
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(2)油脂POV的测定(采用GB/T5009.37-2003食用植物油卫生标准的分析方法)
a.标准曲线回归方程的确定：分别精密吸取Fe3+溶液(0.01g/L)0、0.20、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00mL(各相当于铁量0.0、2.0、5.0、10.0、20.0、30.0、40.0μg)于洁净干燥的10mL比色管中，用三氧甲烷-甲醇(7：3)混合溶液稀释至刻度，混匀。加1滴硫氰酸钾(300g/L)混匀，室温(10-35℃)下精确放置5min后，移入1cm比色皿中，以0号为参比，波长500nm处测定吸光度，得回归直线方程为：A=0.02357c+0.01074(R=0.9994)，其中c为铁的质量(μg，实际为浓度，比色管体积致，为计算方便，取铁的质量)。
b.GB/T法测油脂POV：分别称取3份1g左右的原料油，置于小烧杯中，用三氯甲烷甲醇(7：3)溶解，转移至25mL容量瓶中，用三氧甲烷-甲醇混合溶液(7：3)定容至25mL，充分摇匀。再用移液管从中移取1mL于10mL的比色管中，按照GB/T5009.37-2003进行显色，即加1滴氧化亚铁(3.5g/L)，加三氧甲烷甲醇(7：3)混合溶液至刻度，再加1滴硫氰酸钾，混匀，室温下放置5min，同时做一空白试样，1cm比色皿，0号为参比，500nm波长下测吸光度，按下式计算POV(meq/Kg)：
, 百拇医药
POV=(C-C0)/(m×55.84×2)
式中：C、C0-回归方程求得的试样中Fe离子及空白试样相当的Fe离子的质量(μg)：
m-显色时相当试样的质量(g)：
55.84-Fe的原子量：
2-换算因子。
结果与讨论
1、几种破壁提油方法的比较
几种破壁提油方法实验结果见表1。
由表1可以得出，碱性乙醚法提油率最高，但是在提油过程中加入了氨水等试剂，可能会引起油脂性质的改变。同时，加入的溶剂不是GB/T5009.372003方法中所用溶剂，故一定要加热除去乙醇、乙醚、石油醚，加热会加速油脂POV的变化。机械研磨法，提油率最低，重复性不好，需要大量的人力劳动，而且样品置于空气中被氧化的可能性大。超声波破壁法，提油率介于以上两种方法之间，实验的重复性较好，耗费的人力、物力较少，破壁时间短，与空气接触的可能性小，样品被氧化的可能性也小，而且所用溶剂不需加热除去。
, 百拇医药
2、超声波粉碎时间对提油率的影响
接超声波破壁法，改变超声波振荡粉碎时问，考察不同粉碎时问对提油率的影响，结果见表2。
由表2可知，振荡粉碎时间在3min以上，所得的提油率基本不变，提油率达到65%，仍有近34%油脂不能够提取。提取较难的油脂理论上应是包埋最完好的，被严密包埋的油脂完全不与空气接触，其对POV影响小，对我们评价微胶囊粉末油脂的整体影响也应该较小。
3、超声波处理对油脂POV的影响
分别称取3份1g左右与GB/T法测油脂POV相同的原料油，置于小烧杯中，加入17mL三氯甲烷，超声波振荡粉碎3min，加入7mL甲醇，转移至25mL容量瓶中，用三氧甲烷-甲醇混合溶液(7：3)定容至刻度，再用移液管从中移取1mL于10mL的比色管中，按照GB/T5009.372003进行显色，测吸光度计算POV。同时，对不经超声波处理的原料油按GB/T法测其POV，实验结果列于表3。
由表3可知，超声波处理油样的POV为4.40±0.05，而未经超声处理为4.37±0.07。经过t检验，说明经本实验, http://www.100md.com(熊文珂 蒋瑜 凌德娣等)
材料与方法
1、主要试剂
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盐酸溶液(10mol/L)、过氧化氢(30%)、三氯甲烷-甲醇(7：3)混合溶剂、氧化亚铁溶液(3.5g/L)。硫氰酸钾溶液(300g/L)、Fe3+标准储备溶液(1.0g/L)、Fe3+标准使用溶液(0.01g/L)、氨水(25%)、乙醇(95%)。乙醚(不含过氧化物)、石油醚(沸程30～60℃)，均为分析纯：微胶囊粉末油脂、微胶囊粉末油脂原料油(无锡超科食品有限公司提供)。
2、主要仪器
紫外可见分光光度计8500、JY96-II超声波细胞粉碎机。恒温水浴锅、真空干燥箱、研钵、电子分析天平、过滤装置、抽脂瓶、具塞玻璃比色管、容量瓶及常用的玻璃仪器等。
3、实验方法
(1)微胶囊粉末油脂的破壁提油
, 百拇医药 a.碱性乙醚法：称取2g左右的样品，用10mL(60℃)水分数次溶解于抽脂瓶中，加入1.25mL氨水，充分混匀，置60℃水浴中加热5min，再振摇2min，加入10mL乙醇，充分摇匀，于冷水中冷却后，加入25mL乙醚，振摇0.5min，加入25mL石油醚，再振摇0.5min，静置30min，待上层液澄清时，读取醚层体积，放出一定体积醚层于恒重的烧瓶中，蒸馏回收乙醚和石油醚，挥发残余醚后，于80℃真空干燥箱中干燥1.5h，取出放入干燥器中冷却至室温后称重，重复操作至恒重。
b.机械研磨法：称取2g左右的样品于研钵中，分次加入25mL氯仿溶液，充分研磨5min，过滤，将滤液蒸馏，回收所用的提取溶剂，挥发残余溶剂后，于80℃真空干燥箱中干燥1.5h，取出放入干煤器中冷却至室温后称重，重复操作至恒重。
C.超声波破壁法：称取2g左右的样品于50mL小烧杯中，加入25mL氯仿溶液，超声波振荡粉碎4min后过滤，将滤液蒸馏，回收所用的提取溶剂，挥发残余溶剂后，于80℃真空干燥箱中干燥1.5h，取出放入干燥器中冷却至室温后称重，重复操作至恒重。
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(2)油脂POV的测定(采用GB/T5009.37-2003食用植物油卫生标准的分析方法)
a.标准曲线回归方程的确定：分别精密吸取Fe3+溶液(0.01g/L)0、0.20、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00mL(各相当于铁量0.0、2.0、5.0、10.0、20.0、30.0、40.0μg)于洁净干燥的10mL比色管中，用三氧甲烷-甲醇(7：3)混合溶液稀释至刻度，混匀。加1滴硫氰酸钾(300g/L)混匀，室温(10-35℃)下精确放置5min后，移入1cm比色皿中，以0号为参比，波长500nm处测定吸光度，得回归直线方程为：A=0.02357c+0.01074(R=0.9994)，其中c为铁的质量(μg，实际为浓度，比色管体积致，为计算方便，取铁的质量)。
b.GB/T法测油脂POV：分别称取3份1g左右的原料油，置于小烧杯中，用三氯甲烷甲醇(7：3)溶解，转移至25mL容量瓶中，用三氧甲烷-甲醇混合溶液(7：3)定容至25mL，充分摇匀。再用移液管从中移取1mL于10mL的比色管中，按照GB/T5009.37-2003进行显色，即加1滴氧化亚铁(3.5g/L)，加三氧甲烷甲醇(7：3)混合溶液至刻度，再加1滴硫氰酸钾，混匀，室温下放置5min，同时做一空白试样，1cm比色皿，0号为参比，500nm波长下测吸光度，按下式计算POV(meq/Kg)：
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POV=(C-C0)/(m×55.84×2)
式中：C、C0-回归方程求得的试样中Fe离子及空白试样相当的Fe离子的质量(μg)：
m-显色时相当试样的质量(g)：
55.84-Fe的原子量：
2-换算因子。
结果与讨论
1、几种破壁提油方法的比较
几种破壁提油方法实验结果见表1。
由表1可以得出，碱性乙醚法提油率最高，但是在提油过程中加入了氨水等试剂，可能会引起油脂性质的改变。同时，加入的溶剂不是GB/T5009.372003方法中所用溶剂，故一定要加热除去乙醇、乙醚、石油醚，加热会加速油脂POV的变化。机械研磨法，提油率最低，重复性不好，需要大量的人力劳动，而且样品置于空气中被氧化的可能性大。超声波破壁法，提油率介于以上两种方法之间，实验的重复性较好，耗费的人力、物力较少，破壁时间短，与空气接触的可能性小，样品被氧化的可能性也小，而且所用溶剂不需加热除去。
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2、超声波粉碎时间对提油率的影响
接超声波破壁法，改变超声波振荡粉碎时问，考察不同粉碎时问对提油率的影响，结果见表2。
由表2可知，振荡粉碎时间在3min以上，所得的提油率基本不变，提油率达到65%，仍有近34%油脂不能够提取。提取较难的油脂理论上应是包埋最完好的，被严密包埋的油脂完全不与空气接触，其对POV影响小，对我们评价微胶囊粉末油脂的整体影响也应该较小。
3、超声波处理对油脂POV的影响
分别称取3份1g左右与GB/T法测油脂POV相同的原料油，置于小烧杯中，加入17mL三氯甲烷，超声波振荡粉碎3min，加入7mL甲醇，转移至25mL容量瓶中，用三氧甲烷-甲醇混合溶液(7：3)定容至刻度，再用移液管从中移取1mL于10mL的比色管中，按照GB/T5009.372003进行显色，测吸光度计算POV。同时，对不经超声波处理的原料油按GB/T法测其POV，实验结果列于表3。
由表3可知，超声波处理油样的POV为4.40±0.05，而未经超声处理为4.37±0.07。经过t检验，说明经本实验, http://www.100md.com(熊文珂 蒋瑜 凌德娣等)