水产中孔雀石绿残留量快速检测新技术
目前检测孔雀石绿方法有实验室标准方法及现场快速筛查方法。实验室的标准检测方法主要是高效液相色谱法、高效液相色谱-质谱法，能够提供较高的灵敏度和回收率，但是色谱法需要昂贵的仪器，费时且检测成本高，不适用于大量样品的筛选，也难在基层检测单位以及食品企业推广使用，同时检测时间仍很难满足企业产品质量安全控制的实际需求。现场快速筛查方法快速、经济但只是起到对待检样品的初步快速筛查，实验结果受人为因素影响较大，不能准确定性、定量和及时记录传输结果。
现本方法采用北京六角体科技发展有公司限研制的便携干式分析仪，结合六角体科技研制的孔雀石绿快速检测试剂盒-柱净化点滴板比色法，利用便携干式分析仪记录色斑达到现场定性定量快速准确检测孔雀石绿的目的。水产品中孔雀石绿快速提取样液经过柱色谱分离净化及隐色孔雀在线快速衍生转化成有色孔雀石绿，分离衍生样液并浓缩于聚四氟乙烯点滴板上，采用便携干式分析仪快速定量检测，设计了5个添加水平(1.0、2.0、5.0、10.0、20.0μg/kg)6次重复试验。结果表明，方法线性范围为0～20.0μg/ kg；检测限均为1.0μg/kg，回收率在70%～85%之间，RSD在3.6%～12.5%之间，在30分钟内完成整个检测过程。本方法操作简单、检测时间短、对实验人员素质要求不高、可准确定量检测水产品中孔雀石绿含量，并可现场记录传输结果，可以满足基层检测及执法单位的需求。
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实验部分
1.仪器、设备和试剂
便携干式分析仪(北京六角体科技发展有限公司)；
孔雀石绿快速检测试剂盒(北京六角体科技发展有限公司)。
2.实验方法
(1)检测范围
鱼、虾等水产品肌肉组织。(2)技术指标
检测下限：1.0μg/kg。(3)样品前处理
样品前处理操作如图1所示。
结果与讨论
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1.干式分析仪快速测定条件的选择
在进行试验测试之前，应先对仪器工作条件进行选择设置工作。首先打开软件界面，然后对检测项目设置及企业基本信息设置进行填写，之后对卡类型进行选择，最后将检测卡放入卡槽，点击开始测试按钮进行结果的测定。其流程如图2。
(1)检测项目设置
检测项目选择孔雀石绿，食品种类选择鱼肉(虾肉)。
抽样时间的设置根据具体抽取样品的时间设置。
稀释倍数根据实际稀释情况填写，如果在试验操作中没有对样品进行稀释则填写1，如试验操作过程中将样液进行了稀释，则填写相应的稀释倍数，得到的测试结果要乘以稀释倍数才是最终的试验结果。
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样品名称及检测单位根据实际情况填写。
(2)企业基本信息设置
企业基本信息设置里包括生产企业，被抽检企业，食品名称，产品商标，生产批次及产品规格，对这些内容根据实际的样品信息进行填写。此部分用于对样品的测试结果进行报告分析，不会对测试结果产生直接影响。
(3)卡类型选择
卡类型选择渗滤化学显色卡。
2.技术验证数据
(1)方法的线性
对空白鱼肉组织样品分别添加0、1、2、5、10、20μg/kg孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫标准溶液，经前处理过程得到待测物质，上干式分析仪测相应的灰度值，以浓度为横坐标，灰度值为纵坐标，得到标准曲线，如图3、4、5、6所示。(X为待测物浓度，Y为灰度值)；线性范围为0～20μg/kg。标准曲线分别为Y= -3.9747X+599.67(r=0.9912)；Y= -4.3260X+598.73(r=0.9929)；Y= -4.1417X+595.90(r=0.9814)；Y= -4.1118X+607.87(r=0.9908)；X为待测物浓度，Y为灰度值；线性范围为0～20μg/kg。
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(2)方法的检出限、添加回收率及精密度
鱼肉及虾肉组织添加回收样品，干式分析仪测定，回收率和精密度结果如表1。本方法在1、2、5、10、20μg/kg5个添加水平，每个浓度重复测定6次，方法的回收率均在70%～85%之间。从表1中，1μg/kg添加水平符合分析质量要求的试验结果，确定该方法孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的检出限均为1μg/kg。
(3)方法与国标法实际样品检测对照结果
实际鱼样经国标法GB/T 20361—2006测定结果，阳性样品孔雀石绿为5.0μg/kg、隐色孔雀石绿为2.0μg/kg 、结晶紫为1.0μg/kg、隐色结晶紫为5.0μg/kg。采用干式分析仪分析鱼样结果(每个样品平行测定3次)，结果如表2。从表2中可看出，干式分析的方法结果与国标法检出的结果偏差不大，可满足基层检测及执法单位的需求。
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现本方法采用北京六角体科技发展有公司限研制的便携干式分析仪，结合六角体科技研制的孔雀石绿快速检测试剂盒-柱净化点滴板比色法，利用便携干式分析仪记录色斑达到现场定性定量快速准确检测孔雀石绿的目的。水产品中孔雀石绿快速提取样液经过柱色谱分离净化及隐色孔雀在线快速衍生转化成有色孔雀石绿，分离衍生样液并浓缩于聚四氟乙烯点滴板上，采用便携干式分析仪快速定量检测，设计了5个添加水平(1.0、2.0、5.0、10.0、20.0μg/kg)6次重复试验。结果表明，方法线性范围为0～20.0μg/ kg；检测限均为1.0μg/kg，回收率在70%～85%之间，RSD在3.6%～12.5%之间，在30分钟内完成整个检测过程。本方法操作简单、检测时间短、对实验人员素质要求不高、可准确定量检测水产品中孔雀石绿含量，并可现场记录传输结果，可以满足基层检测及执法单位的需求。
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实验部分
1.仪器、设备和试剂
便携干式分析仪(北京六角体科技发展有限公司)；
孔雀石绿快速检测试剂盒(北京六角体科技发展有限公司)。
2.实验方法
(1)检测范围
鱼、虾等水产品肌肉组织。(2)技术指标
检测下限：1.0μg/kg。(3)样品前处理
样品前处理操作如图1所示。
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1.干式分析仪快速测定条件的选择
在进行试验测试之前，应先对仪器工作条件进行选择设置工作。首先打开软件界面，然后对检测项目设置及企业基本信息设置进行填写，之后对卡类型进行选择，最后将检测卡放入卡槽，点击开始测试按钮进行结果的测定。其流程如图2。
(1)检测项目设置
检测项目选择孔雀石绿，食品种类选择鱼肉(虾肉)。
抽样时间的设置根据具体抽取样品的时间设置。
稀释倍数根据实际稀释情况填写，如果在试验操作中没有对样品进行稀释则填写1，如试验操作过程中将样液进行了稀释，则填写相应的稀释倍数，得到的测试结果要乘以稀释倍数才是最终的试验结果。
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样品名称及检测单位根据实际情况填写。
(2)企业基本信息设置
企业基本信息设置里包括生产企业，被抽检企业，食品名称，产品商标，生产批次及产品规格，对这些内容根据实际的样品信息进行填写。此部分用于对样品的测试结果进行报告分析，不会对测试结果产生直接影响。
(3)卡类型选择
卡类型选择渗滤化学显色卡。
2.技术验证数据
(1)方法的线性
对空白鱼肉组织样品分别添加0、1、2、5、10、20μg/kg孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫标准溶液，经前处理过程得到待测物质，上干式分析仪测相应的灰度值，以浓度为横坐标，灰度值为纵坐标，得到标准曲线，如图3、4、5、6所示。(X为待测物浓度，Y为灰度值)；线性范围为0～20μg/kg。标准曲线分别为Y= -3.9747X+599.67(r=0.9912)；Y= -4.3260X+598.73(r=0.9929)；Y= -4.1417X+595.90(r=0.9814)；Y= -4.1118X+607.87(r=0.9908)；X为待测物浓度，Y为灰度值；线性范围为0～20μg/kg。
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(2)方法的检出限、添加回收率及精密度
鱼肉及虾肉组织添加回收样品，干式分析仪测定，回收率和精密度结果如表1。本方法在1、2、5、10、20μg/kg5个添加水平，每个浓度重复测定6次，方法的回收率均在70%～85%之间。从表1中，1μg/kg添加水平符合分析质量要求的试验结果，确定该方法孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的检出限均为1μg/kg。
(3)方法与国标法实际样品检测对照结果
实际鱼样经国标法GB/T 20361—2006测定结果，阳性样品孔雀石绿为5.0μg/kg、隐色孔雀石绿为2.0μg/kg 、结晶紫为1.0μg/kg、隐色结晶紫为5.0μg/kg。采用干式分析仪分析鱼样结果(每个样品平行测定3次)，结果如表2。从表2中可看出，干式分析的方法结果与国标法检出的结果偏差不大，可满足基层检测及执法单位的需求。
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