柱前在线衍生-高效液相色谱法测定婴幼儿配方奶粉中牛磺酸
检测器,波长,1材料与方法,1仪器,2试剂与配制溶液,3色谱条件,4样品处理,5测定,2结果与分析,1方法优化,2精密度实验,3重复性实验,4加标回收率实验,5线性范围确定,3结论
□ 张冬生 李 强 翟洪稳 王 娟 河北省食品安全重点实验室 河北省食品检验研究院牛磺酸是一种含硫氨基酸,主要以游离状态存在于动物乳汁、脑与心脏中,在哺乳动物的心脏中含量最高。牛磺酸除了能促进大脑的正常发育外,还能增强机体的免疫力[1]。
常用的牛磺酸含量测定方法有酸碱滴定法、荧光法、氨基酸分析仪法、薄层扫描法和高效液相色谱法等[2-8]。牛磺酸属于极性大且无紫外吸收的化合物,需进行衍生化。食品安全国家标准食品中牛磺酸的测定方法为邻苯二甲醛(OPA)柱后衍生高效液相色谱法[9]。样品经预处理,在钠离子氨基酸分析专用柱中被分离,再与OPA进行衍生反应,由荧光检测器进行检测,外标法定量。该方法具有灵敏度高、定量准确等优点,但是分离需使用专用的钠离子氨基酸交换柱和柱后衍生反应器、衍生剂驱动泵等专用辅助仪器。本方法与国家标准测定方法不同,采用柱前在线加入OPA衍生化试剂,在碱性条件下与牛磺酸产生强荧光的物质,通过荧光检测器测定衍生物的含量,以此来确定牛磺酸的含量,其操作简单方便、检测快速、灵敏,且不需辅助仪器,只需通过普通的液相色谱C18柱就可进行牛磺酸的测定。
1 材料与方法
1.1 仪器
Agilent 1200高效液相色谱仪(配有荧光检测器),安捷伦公司;KQ-250DV超声仪,昆山市超声有限公司;3K15离心机,SIGMA公司。
1.2 试剂与配制溶液
1.2.1 试剂
牛磺酸标准品,纯度≥98%,购于Chem Service;乙腈、甲醇、三水合乙酸钠、氢氧化钾 ......
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