定性PCR法检测牡蛎中的创伤弧菌
革兰,1材料与方法,1材料与试剂,2仪器与设备,3实验方法,4生化鉴定,5PCR检测,6凝胶电泳,2结果与分析,1分离培养,2嗜盐性试验,3VITEK鉴定,4PCR检测结果,3讨论
□ 董慧明 辽宁省检验检测认证中心创伤弧菌也称海洋弧菌,革兰氏阴性菌,属于弧菌属,是一种嗜盐菌,广泛存在于海洋环境中。创伤弧菌是主要的海洋致病细菌之一,能够引起食源性疾病、伤口感染、加剧肝病或基本疾病患者的病情。生牡蛎是创伤弧菌引起食源性疾病的主要传染源[1]。牡蛎(俗称生蚝)因味道鲜美、营养丰富,深受广大消费者喜爱,但其易受到多种食源性病原菌和寄生虫的感染,属于众多水产品中风险较高的一类传染源[2]。感染创伤弧菌后易引起发烧、腹泻、低血压等急性肠胃炎症状,严重可致组织感染和败血症,甚至引起死亡。本研究依据《食品安全国家标准 食品微生物学检验 创伤弧菌检验》(GB 4789.44-2020)对牡蛎进行检验,采用全自动细菌鉴定系统(VITEK)获得的生化结果用于验证定性PCR法鉴定创伤弧菌的准确性[3]。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
蛋白胨-氯化钠-纤维二糖-多粘菌素E(PNCC)增菌液、CC琼 脂培养基平板、mCPC琼脂培养基平板、3%NaCl胰蛋白胨大豆琼脂平板(3%TSA)、革兰染色剂(北京陆桥技术有限公司);革兰阴性鉴定卡(生物梅里埃美国股份有限公司);创伤弧菌标准菌株ATCC2756、副溶血性弧菌标准菌株ATCC17802(美国菌种保藏中心);DNA提取试剂盒(上海生工生物技术有限公司);PCR反应配套试剂(大连宝生物工程有限公司);琼脂糖(美国sigma公司) ......
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