唐金凤，鲁耀邦，桂柳姿

    (湖南中医药大学药学院，中药药性与药效三级科研实验室，省中药现代化研究实验室，湖南 长沙410208)

    黄花石蒜(Lycoris aurea Herb.)系石蒜属植物，内含生物碱、多糖、黄酮、氨基酸及凝集素等化学成分[1-3]，其中加兰他敏含量比石蒜属其他植物高[4]。加兰他敏是治疗阿尔茨海默氏病(AD)的首选药物之一。临床研究表明，加兰他敏可明显改善AD 患者的认知能力且毒副作用小，其作为治疗轻度至中重度AD 的药物已在欧盟国家上市[5-7]。通过相关文献研究发现：七月份的黄花石蒜花中加兰他敏的含量花中含量最高，茎(花葶)含量最少[8]，另有文献表明花中花蕊部分加兰他敏含量最高[9]，提示黄花石蒜不同部位中生物活性物质加兰他敏合成相关关键酶基因及加兰他敏生物合成代谢途径存在差异。目前加兰他敏生物合成代谢途径尚不明确，本实验以此为立题依据，借助近年来检测基因的一种高效方法—mRNA 差异显示技术(DD-PCR)[10]，研究黄花石蒜的花蕊与花葶的差异表达，并对其克隆进行生物信息学分析，为黄花石蒜中加兰他敏合成代谢提供可靠的理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    黄花石蒜采自于湖南衡山，经湖南中医药大学中药鉴定教研室潘清平教授鉴定为石蒜科石蒜属植物Lycoris aurea Herb.。

    1.2 主要试剂

    RNA 提取试剂盒购自TIANGEN 公司；26 条随机引物和3 条锚定引物购自上海生物工程有限公司；反 转 录 酶M-MLV，RNasin Inhibitor 购 自Promega 公司；QIAEX Gel Extraction Kit 购自美国QIAGEN 公 司；PMD19-T Vector 购 自TaKaRa 公司。

    1.3 方法

    1.3.1 黄花石蒜花蕊与花葶总RNA 的提取 参照TIANGEN 植物总RNA 提取试剂盒的说明书进行操作[11] ......