陈 林，崔培梧，鲁耀邦，廖 彦，张志丽，张书航，黄绍国，易刚强*

    (1.湖南中医药大学药学院，湖南 长沙 412008；2.湖南中医药大学中药药性与药效实验室，湖南 长沙 410208)

    茉莉酸甲酯对茯苓三萜生物合成的调控研究

    陈 林1,2，崔培梧1,2，鲁耀邦1,2，廖 彦1,2，张志丽1,2，张书航1,2，黄绍国1,2，易刚强1,2*

    (1.湖南中医药大学药学院，湖南 长沙 412008；2.湖南中医药大学中药药性与药效实验室，湖南 长沙 410208)

    目的 探索茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)对茯苓三萜生物合成的调控效应及其机制。方法 从MeJA添加量、添加时间角度考察MeJA对茯苓三萜生物合成的调控效应，确定最佳调控策略，在此基础上采用荧光定量PCR(Real time PCR,RT-PCR)技术分析MeJA对茯苓甲羟戊酸途径法尼基焦磷酸合成酶基因(fps)和鲨烯合酶基因(sqs)基因表达水平的影响，揭示其调控机制。结果 MeJA可显著促进茯苓三萜的生物合成，最佳添加策略为发酵4 d添加150 μmol/L的MeJA，此时茯苓三萜得率可达20.95 mg/L，为空白组的1.55倍、吐温-80组的1.32倍；RT-PCR结果显示MeJA可使fps、sqs基因表达水平显著上调，分别为吐温-80对照组的1.17倍、788.70倍。结论 MeJA通过显著上调sqs基因表达实现茯苓三萜生物合成的过程强化，为一种有效的促进茯苓三萜合成的外源调控因子。

    茯苓；三萜；生物合成；发酵调控；茉莉酸甲酯

    茯苓[Wolfiporia cocos(Schwein.)Ryvarden&Gilb.(Basidiomycota,Polyporaceae)]俗称茯菟，其性甘味平，入心、肺、脾、肾经，具有渗湿利水、健脾和胃、宁心安神、强精益髓之功效，为我国名贵大品种菌类中药，始载于《五十二病方》，在《神农本草经》被列为上品[1-4]。目前超过80%的中药方剂都配伍了茯苓，如四君子汤、茯苓半夏汤、茯苓补心汤、天王补心丹、五苓散等[5]；此外以茯苓为原料配伍的中成药也有300多种[6]，这使得市场对茯苓资源的需求日益扩大。

    研究表明三萜为茯苓的主要活性成分之一，具有抗癌、抗炎、降糖等多种活性[7-9]，且发酵菌丝体中茯苓三萜含量明显优于茯苓菌核[10]，这进一步证实了采用发酵法生产茯苓活性成分的可行性。在真菌中，三萜类化合物主要由甲羟戊酸途径(mevalonate pathway,MVA)合成[11] ......