2.7 CYP3A4 mRNA表达测定

    通过逆转录定量PCR检测小鼠肝微粒中CYP3A4 mRNA的表达，具体步骤如下：在研钵中加入液氮研磨适量肝微粒体，磨碎后加入1 mL Trizol，离心(12 000×g，5 min，4 ℃)取上清，加入200 μL三氯甲烷，静置5 min后，再次离心(12 000×g，5 min，4 ℃)，取上清并加入400 μL异丙醇，静置10 min后离心(12 000×g，10 min，4 ℃);弃上清，加入75%乙醇洗涤沉淀后离心(12 000×g，10 min，4 ℃);取沉淀，加入无酶水重悬，酶标仪检测RNA浓度;预变性后进行逆转录得到cDNA，使用SYBR PCR试剂盒进行qPCR检测。CYP3A4引物：正向引物GCCACTCACCCTGATGTCC，反向引物CACCACCATGTCAAGATACTCC;引物长度117 bp。GAPDH引物：正向引物CGGCAAATTCAACGGCACA ......