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编号:13473705
益心泰方对慢性心力衰竭兔心肌组织β-MHCmRNA及蛋白表达的影响(3)
http://www.100md.com 2020年6月1日 《湖南中医药大学学报》 20206
     1.7.2 心功能指标检测 应用彩色超声诊断仪检测实验兔心功能指标:LVEF、LVFS、E/A。

    1.7.3 心肌组织病理结构 取出各组兔模型心脏,剪取体积为3 mm×3 mm×3 mm大小的心肌组织,经过固定、漂洗、脱水、干燥、包埋、染色等一系列工序处理后,在透射电子显微镜下拍摄观察。

    1.7.4 Western blot法检测心肌β-MHC蛋白表达 取100 mg心肌组织加入裂解液,高速匀浆2~3 min,冰上放置20 min,收集裂解液,4 ℃、12 000 r/min离心15 min,吸取上清液,即为心肌组织蛋白,配制BCA工作液及SDS-PAGE浓缩胶与分离胶、上样,电泳,首先稳压80 V电泳约20 min,待样品进入分离胶后,调至稳压120 V,电泳至溴酚蓝到达凝胶底部时停止,其后进行转膜,待转膜结束后,用TBST液洗涤印迹膜3次,每次5 min,之后放入5%脱脂奶粉/TBST封闭液内,室温封闭1 h,分别加入稀释后抗体β-MHC及GAPDH,经过一抗孵育、二抗孵育后及标记物显色等步骤后,显影成像,计算β-MHC与GAPDH两者灰度值之间的比值 ......
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