刘倩宏 陈立浩 时健 朱冰瑶 曾令聪 姚小磊

    〔摘要〕 目的 觀察青光安颗粒剂含药血清对视网膜神经节细胞-5(retinal ganglion cells-5， RGC-5)损伤模型中线粒体自噬和相关蛋白的影响。方法 将14只大鼠随机分为空白对照组(3只)和青光安组(11只)。青光安组灌胃青光安颗粒剂，空白对照组灌胃同等剂量的生理盐水，1次/d，灌胃7 d，第7天灌胃后提取含药血清和空白血清。培养RGC-5细胞，用谷氨酸毒性模拟青光眼所造成的神经细胞损伤，CCK8法筛选合适的含药血清和谷氨酸浓度。细胞分组为正常细胞组、空白血清组(谷氨酸+空白血清)、含药血清组(谷氨酸+含药血清)、3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine， 3-MA)+空白血清组(谷氨酸+3-MA+空白血清)、3-MA+含药血清组(谷氨酸+3-MA+含药血清组)。细胞培养24 h后，荧光共定位检测线粒体自噬发生情况;Western blot检测微管相关蛋白轻链3(microtubule associated protein light chain 3， LC3)中LC3-Ⅱ/LC3-I、溶酶体相关膜蛋白1(lysosome associated membrane protein1， LAMP1)蛋白的表达。结果 通过CCK8结果筛选，确定谷氨酸最佳的作用浓度为20 mmol/L，空白血清和含药血清的作用浓度均为20%。与空白血清组相比，含药血清组、3-MA+空白血清组和3-MA+含药血清组的溶酶体含量显著降低(P0.05);与空白血清组相比，含药血清组、3-MA+空白血清组和3-MA+含药血清组的溶酶体含量显著降低(P<0.05)。见图2-3。

    2.3? Western blot检测谷氨酸损伤细胞相关蛋白表达的情况

    与正常细胞组相比，空白血清组、含药血清组、3-MA+空白血清组和3-MA+含药血清组中的LAMP1和LC3-Ⅱ/LC3-I的蛋白表达水平均显著增加(P<0.05);与空白血清组相比 ......