量子点为载体转染survivinsiRNA至人舌鳞癌Tca8113细胞的研究(2)
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参见附件。
(3)溶液2的配制：245 L OPTI-MEM I+5 L siRNA每孔(总体积250 L)。
(4)将溶液1轻轻地与溶液2混合，室温下孵育20 min。同时，将6孔板的细胞用无血清且不含抗生素的培养基漂洗2遍，加入1.5 mL OPTI-MEM I。
(5)将溶液1与溶液2的混合液逐滴加入孔中，轻轻摇动培养板混匀。置37℃，5% CO2培养箱中培养5～6 h后更换含血清不含抗生素的生长培养基，置37℃，5% CO2 养箱中继续培养。
(6)转染24 h后在荧光显微镜蓝光下观察各组细胞转染情况并拍照，同时计算转染率。转染率=(每100个细胞中表达荧光的细胞/100)×100%
2.3 定量RT-PCR检测转染后48h的Tca8113细胞中survivin mRNA表达
(1)细胞总RNA的提取
(2)去基因组
使用RNase-free的DNase(Promega)，按以下体系配置反应液，37 ℃消化30 min，65 ℃灭活10 min。
(3)总RNA纯度和完整性检测
①纯度检测：取1 μL RNA样品60倍稀释，在BioPhotometer plus 艾本德核酸蛋白测定仪上测定OD值，OD260/OD280的比值>1.8，说明制备的RNA较纯，无蛋白质污染。
②总RNA完整性检测：取RNA样品1 μL，1%琼脂糖凝胶电泳80V×20 min，用凝胶成像系统观察总RNA的5s rRNA，18 s rRNA和28 s rRNA条带，三条条带完整的话即可证明总RNA抽提比较完整。
4 讨论
激光共聚焦显微镜证实了量子点为载体可以成功转染survivin siRNA至Tca8113细胞(图2)以及量子点的使用范围在安全范围内 ......
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