1 资料与方法

    1.1 一般资料

    乳腺癌MCF-7细胞系(美国ATCC公司)、RPMI 1640细胞培养液(美国Gibco公司)、胎牛血清(美国Gibco公司)、二氧化钴(美国Sigma公司)、4%多聚甲醛固定液(北京Solarbio科技有限公司)、FuGENE HD转染试剂(美国罗氏公司)、Transwell小室(美国康宁生物科技公司)、一抗兔抗人NICD(密理博公司 Millipore，Cat：07-1232，工作浓度1∶100)，二抗即用型试剂盒(PV6001、PV9001)及DAB显色试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

    1.2 实验方法

    1.2.1 MCF-7细胞培养 含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液作为培养基。以4×105个/孔采用6孔板进行接种，常规组加入磷酸盐缓冲液(phosphate buffer saline，PBS)作为对照，缺氧Ⅰ组、缺氧Ⅱ组则分别以50 μmol/L和100 μmol/L浓度的二氧化钴处理 ......