吴伟全，李元歌，王思捷，王永存，吴 平

    (1、广东医学院临床医学研究中心，广东 湛江 524001；2、广东医学院附属医院放射科，广东 湛江 524001；3、广东医学院附属医院肿瘤科，广东 湛江524001)

    随着生物医学研究的发展，通过激光扫描共聚焦显微镜动态观察活细胞内离子变化，特别是钙离子，是目前研究的热点[1]。而动态观察活细胞内离子变化实验研究中，通过维持最佳CO2及温度条件去维持细胞活性状态尤为关键。但是目前活细胞内离子变化动态观察中，CO2及温度条件改变对活细胞活性状态产生影响尚不完全清楚。本实验通过显微活细胞培养系统改变CO2及温度条件，探讨CO2及温度对动态观察活细胞Ca2+变化的影响，为活细胞动态观察实验研究中维持最佳CO2及温度条件提供理论和实验依据。

    1 材料和方法

    1.1 材料、主要仪器及试剂 活细胞A549为本实验室保存。激光扫描共聚焦显微镜(德国Leica公司)；显微活细胞培养系统(德国IncubatorS-2、CTIController 3700 digital、Tempcontrol 37-2 digital)；35 mm NEST激光共聚焦培养皿 (耐思生物科技有限公司)；DMEM高糖培养基(Gibco公司)；新生小牛血清(民海生物公司)；青霉素-链霉素双抗试剂(杭州吉诺公司)；0.25%胰酶 (Trypsin)-0.02%EDTA溶液 (杭州吉诺公司)；PBS缓冲液(武汉博士德公司)；Fluo-4/AM 荧光染色剂(美国Invitrogen公司)。

    1.2 活细胞A549的激光共聚焦培养皿培养 人肺上皮细胞株A549细胞接种于35 mm NEST激光共聚焦培养皿，培养于DMEM高糖培养液中,其中含小牛血清10%、青霉素(100 mg/L)和链霉素(100 mg/L),置于37℃、5%CO2培养箱中无菌培养。第二天细胞长满70%～80%皿底可用于活细胞动态观察。

    1.3 显微活细胞培养系统的建立 将显微培养器IncubatorS-2安置于激光扫描共聚焦显微镜的镜头上 ......