邓惠坚 ，卢群 ，林转娣 审校

    (1.广州市番禺区中心医院；2.广东药科大学；3.广州市番禺区中心医院，广州 番禺 511400)

    高血压是心脑血管疾病最重要的危险因素之一，长期的血压升高促进动脉管壁发生弥漫性纤维性硬化，最终导致心、脑及肾等靶器官损害[1]。在动脉粥样硬化的发生发展过程，VSMCs 参与了动脉壁生理功能和病理变化[2,3]。当血管内皮细胞功能受损后，内皮细胞合成及分泌的血管活性物质与细胞因子间的平衡会被破坏，导致白细胞黏附，诱导 VSMCs 发生表型转化并迁移到内膜下[4]。活化的 VSMCs 大量增殖并摄取氧化型低密度脂蛋白形成泡沫细胞，大量泡沫细胞堆积会引发动脉粥样硬化的形成及病理性内膜增厚[5,6]。高血压、超重/肥胖和吸烟是导致AS 发生的主要三种危险因素，本实验是利用的高血压和导致肥胖的高脂饮食的危险因素促进AS 模型的快速构建，而动脉粥样硬化形成的血管平滑肌细胞增强的增殖和迁移能力将有助于细胞培养。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    ⑴实验动物 10 周龄雄性SPF 级自发性高血压大鼠和10 周龄的SD 大鼠各 12 只，体重(230±15)g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。

    ⑵饲料 高脂高胆固醇饲料 (配方：4% 胆固醇，0.5% 胆酸钠，0.2% 丙基硫氧嘧啶，10%猪油，5% 白糖，80.3% 普通饲料)。

    ⑶实验仪器 超净工作台(SW-CJ-2F，苏净集团安泰公司)SHEL L/JB CO2培养箱 (Heraeus，德国)倒置荧光显微镜(Olympus，Tokyo，Japan)病理切片设备 全自动生化分析仪(美国亚培公司)。

    ⑷实验试剂 胎牛血清(Gibco 公司) 青霉素和链霉素(吉诺生物有限公司)高糖培养基(Dulbecco's Modified Eagle Medium, DMEM, Gibco 公司)磷酸盐缓冲液(Phosphate Buffered Saline, PBS) 4%多聚甲醛(广州翔博) 4',6-二脒基-2-苯基吲哚染色液(4',6-diamidino-2-phenylindole, DAPI, 碧云天公司) 抗α 平滑肌肌动蛋白抗体 (alpha smooth muscle actin, α-SMA, Abcam) 荧光二抗 (R&D) 维生素D3 注射液 (上海通用药业公司) 10% 水合氯醛(广东药科大学附属第一医院) ......