凌敏

    (周口市中心医院检验科，河南 周口 466000)

    碳青霉烯类抗生素是治疗肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumonia，KP)的最重要手段之一[1]，随着碳青霉烯类抗生素大规模生产及不规范应用，临床出现了以肠杆菌科细菌为主要代表的对碳青霉烯类不敏感的细菌菌株，包含沙雷菌属、埃希菌属、克雷伯菌属、沙门菌属等[2]，多重耐药细菌的出现给临床治疗带来了极大挑战。因此尽早准确检测出碳青霉烯类非敏感类肠杆菌科细菌(carbapenem-resistant Enterobacteriaceae，CRE) 对临床阻断或减缓耐药菌传播有重要意义。目前检测碳青霉烯类非敏感类肠杆菌科细菌的主要方法有改良Hodge 试验 (Modified Hodge Test，MHT)、Carba NP direct 试验(CNPt-d)、Carba?NP 试验(CNPt)等[3]，但MHT、CNPt-d、CNPt 三种检测方法的比较国内还鲜有报道。本研究收集我院2018 年5 月-2019 年5 月临床分离的碳青霉烯类非敏感类肠杆菌科细菌138 株，以PCR 检测为金标准，对比研究MHT、CNPt-d、CNPt 在碳青霉烯类非敏感类肠杆菌科细菌检测中的应用价值，以期指导临床合理用药，现报告如下。

    1 材料与方法

    1.1 菌株来源 收集我院 2018 年5 月-2019 年5月临床分离的碳青霉烯类非敏感类肠杆菌科细菌138 株用于本研究。入选标准：⑴采用珠海迪尔生物工程有限公司的DL-96 细菌鉴定仪进行细菌鉴定及药敏试验，药敏结果解释参照美国临床和实验室标准研究所(Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI)推荐的 M100-S25 标准，质控菌株为ATCC 700603 及ATCC 25922；⑵碳青霉烯类不敏感表现为对第三代头孢噻肟、亚胺培南、多利培南、头孢曲松、美罗培南具有耐药性；⑶标本来源于引流液、血液、胸腹水、尿液、痰液等。排除标准：⑴重复菌株；⑵药敏结果解释未参照美国CLSI 推荐的M100-S25 标准。

    1.2 检测方法 ⑴PCR：采用DNA 提取试剂盒(美国Mpbio 公司)提取细菌 DNA，使用PCR 仪(美国Bio-Rad 公司) 扩增碳青霉烯酶基因 blaKPC、blaNDM、blaVIM。PCR 反应体系为：模板 2μl、200 μmol/L dNTPs 4μl、10×buffer 5μl、Taq 聚合酶 1.5 U、5μmol/L 上下游引物各 2μl, 用 ddH2O 补足至50μl ......